血管緊張素ⅡAT1受體自身抗體在子癇前期患者血清中的分布及其對(duì)血管活動(dòng)的影響.pdf

1、子癇前期(Preeclampsia，PE)是妊娠期特發(fā)的全身性疾病，多在妊娠20周以后發(fā)病。臨床表現(xiàn)以高血壓、蛋白尿?yàn)樘卣鳎橛腥矶嗯K器的損害，其基本病理生理改變是全身小動(dòng)脈的痙攣性收縮。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，予癇前期的發(fā)病率為5-10％，是母嬰發(fā)病率及死亡率較高的主要原因。子癇前期對(duì)孕產(chǎn)婦的影響主要表現(xiàn)為胎盤早剝、肺水腫、凝血功能障礙、產(chǎn)后出血及產(chǎn)后血循環(huán)衰竭等并發(fā)癥，嚴(yán)重者可致死亡；對(duì)胎兒多是由于胎盤供血不足，胎盤功能減退導(dǎo)致胎

2、兒窘破、胎兒發(fā)育遲緩、死胎、死產(chǎn)或新生兒死亡。目前，對(duì)子癇前期普遍認(rèn)同的病因?qū)W說主要有免疫學(xué)說、子宮-胎盤缺血學(xué)說、血管調(diào)節(jié)物質(zhì)異常、遺傳學(xué)說等，但是相關(guān)治療措施雖能改善病人急性和慢性期的癥狀，但不能從根本上逆轉(zhuǎn)疾病的進(jìn)展和最終防止子癇前期的發(fā)生，提示在子癇前期發(fā)生發(fā)展過程中可能還有其它未知因素的參與。 20世紀(jì)90年代早期，Hanssens和Haller等先后發(fā)現(xiàn)并證實(shí)，子癇前期患者血液中存在一種作用類似血管緊張素Ⅱ(Angi

3、otensinⅠ，Ang-Ⅱ)的循環(huán)因子，使血管緊張素Ⅱ-1型受體(AngiotensinⅡType1Receptor，AT1R)功能增強(qiáng)。1999年，Wallukat等證實(shí)這種類Ang-Ⅱ因子是抗AT1R自身抗體(AngiotensinⅡtype1ReceptorAutoantibodies，AT1-AA)。隨后的研究也相繼證實(shí)AT1-AA存在于子癇前期患者的血清中，但是，研究的標(biāo)本數(shù)較少，此外，沒有該抗體存在與子癇前期體征關(guān)系的分析

4、，即缺乏AT1-AA是否與子癇前期有關(guān)的分析資料，而這一問題的解決是研究AT1-AA在子癇前期發(fā)病中作用的前提。 隨后的研究表明，這種自身抗體通過專一識(shí)別AT1R的細(xì)胞外第二環(huán)功能表位肽段(thesecond.extracellularloopoftheangiotensinⅡtype1receptor，AT1R-ECⅡ，人鼠同源性為99％)促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖、NADPH氧化酶活化、ROS生成、細(xì)胞漿內(nèi)Ca2+濃度增加和激活

5、纖溶酶原激活物抑制因子1。這些研究結(jié)果均提示，AT1-AA的過度活動(dòng)與許多重要的病理生理改變有關(guān)，可能在子癇前期的發(fā)病中起著重要作用。由于子癇前期危害性極大而病因又極其詭異，因而這一成果的重要性和亟待被深入研究的必要性被國內(nèi)的學(xué)者迅速而敏銳地捕捉到，并對(duì)此展開了廣泛的研究。其中尤以廖玉華實(shí)驗(yàn)室的研究最為深入，他們的研究證實(shí)，AT1-AA通過激活A(yù)T1受體誘導(dǎo)大鼠腎臟和心肌組織的免疫損傷并促進(jìn)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖。我實(shí)驗(yàn)室的前期研究也發(fā)

6、現(xiàn)，抗AT1R-ECⅡ抗體通過作用AT1R增強(qiáng)離體灌流心臟的心功能、升高心肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣含量、增加心肌細(xì)胞Ica-L電流、激動(dòng)INa/Ca電流和減小Ik1電流等。這些結(jié)果進(jìn)一步提示，AT1-AA具有AT1受體類激動(dòng)劑樣效應(yīng)。 雖然AT1R廣泛分布于人體各組織器官，介導(dǎo)了目前已知Ang-Ⅱ的所有作用(如收縮血管、促進(jìn)醛固酮分泌、刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖和水鈉潴留等)，但AT1R對(duì)脈管系統(tǒng)的作用尤為突出。因此我們推測，具有AT1受體激

7、動(dòng)劑樣效應(yīng)的AT1-AA是否也具有同樣的血管效應(yīng)呢?如果是，那么AT1-AA是否象AT1受體激動(dòng)劑那樣，也具有致血管病變的病理意義呢?但是到目前為止，已有的研究報(bào)道(包括我們的前期工作)僅局限于通過急性實(shí)驗(yàn)來探討AT1-AA作用的微觀機(jī)制，但缺乏AT1-AA對(duì)各類血管(尤其是阻力血管)作用的直接證據(jù)，而對(duì)這一問題的闡明是認(rèn)識(shí)AT1-AA在子癇前期發(fā)生發(fā)展中作用和研究AT1-AA作用機(jī)制的關(guān)鍵。 如前所述，AT1R廣泛分布于人體各

8、組織器官。在血管系統(tǒng)，AT1R除分布在血管平滑肌外，還廣泛分布在血管內(nèi)皮細(xì)胞，后者在調(diào)節(jié)血管收縮舒張功能中具有重要的作用。如果存在于血液中的AT1-AA隨血液循環(huán)在血管內(nèi)流動(dòng)時(shí)，由于其具有類AT1受體類激動(dòng)劑樣效應(yīng)，那么AT1-AA應(yīng)該可以和血管內(nèi)皮細(xì)胞上的AT1R結(jié)合。但是，這一推測需要實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。眾所周知，在體情況下血管內(nèi)皮損傷后，會(huì)導(dǎo)致流經(jīng)損傷部位的血液中諸多血管活性物質(zhì)的聚集(如血小板、凝血因子等)并引發(fā)隨后的釋放反應(yīng)，這些病理

9、過程都有利于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。在子癇前期患者發(fā)病過程中，一個(gè)典型的病理改變是子宮螺旋小動(dòng)脈存在“類粥樣硬化樣”改變，因此導(dǎo)致胎盤血流量下降，直接危害到胎兒的健康：此外，另一個(gè)典型病理改變是腎小球血管內(nèi)皮下大量纖維樣物質(zhì)沉積，進(jìn)而造成血管管腔狹窄、腎臟血液灌注減少和腎小球?yàn)V過率下降等后果。但是，多年以來，導(dǎo)致這種血管內(nèi)皮細(xì)胞病理改變的機(jī)制一直不清。因此，如果能夠通過直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)說明AT1-AA是導(dǎo)致“類粥樣硬化樣”病變的原因?qū)⒂兄?/p>

10、于認(rèn)識(shí)子癇前期血管病變的機(jī)制。 綜上所述，作者設(shè)計(jì)了本研究課題：(1)通過臨床流行病學(xué)調(diào)查，追蹤子癇前期患者血清AT1-AA的變化，觀察該抗體水平和病情相關(guān)性，明確該抗體的臨床意義。(2)在此基礎(chǔ)上開展實(shí)驗(yàn)室研究，首先以人工合成的AT1R-ECⅡ主動(dòng)免疫大鼠制備抗AT1R-ECⅡ抗體，然后通過離體大血管和微血管環(huán)技術(shù)明確該抗體對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈、主要臟器的小動(dòng)脈(包括冠狀動(dòng)脈、大腦中動(dòng)脈和腎動(dòng)脈)、主要阻力血管(腸系膜動(dòng)脈)和反應(yīng)子

11、宮-胎盤血流量的血管(子宮動(dòng)脈)等不同類型小動(dòng)脈的直接作用。(3)以血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)和功能為切入點(diǎn)，通過離體細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究抗AT1R-ECⅡ抗體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷效應(yīng)和形式；并將抗AT1R-ECⅡ抗體轉(zhuǎn)移進(jìn)入正常大鼠體內(nèi)建立大鼠被動(dòng)免疫模型，然后通過檢測血清中內(nèi)皮素的含量來觀察抗AT1R-ECⅡ抗體對(duì)在體血管內(nèi)皮的損傷作用；通過大血管和微血管環(huán)技術(shù)明確該抗體在在體情況對(duì)血管活動(dòng)的影響。以期闡明AT1-AA致血管類動(dòng)脈粥樣硬化改變的可能性及

12、其防治的意義。 本課題擬驗(yàn)證的假說：子癇前期患者血清中存在的AT1-AA，有可能通過影響血管結(jié)構(gòu)和功能而與子癇前期發(fā)生發(fā)展相關(guān)。(1)在子癇前期患者血清中的AT1-AA與該病的某些特殊指征呈一定的相關(guān)性；(2)AT1-AA對(duì)大血管具有直接的收縮效應(yīng)，但對(duì)不同小動(dòng)脈可能表現(xiàn)各不相同；(3)AT1-AA通過作用于AT1R細(xì)胞外第二環(huán)，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，或許可以進(jìn)而誘發(fā)血管“類動(dòng)脈粥樣硬化”改變。所有這些結(jié)構(gòu)和功能變化可能與子癇前