Nogo-66蛋白的免疫原性及對(duì)慢性高眼壓SD大鼠RGCs免疫保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文Nogo66蛋白的免疫原性及對(duì)慢性高眼壓SD大鼠RGCs免疫保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：岳紅云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：賀翔鴿20080501第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文PredictionServer抗原表位分析軟件進(jìn)行我們前期重組的Nogo一66蛋白抗原表位分析，證明Nogo一66的氨基酸序列具有明確的T淋巴細(xì)胞抗原表位。在此基礎(chǔ)上做了以下研究：一、Nogo66蛋白對(duì)培養(yǎng)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞活化研究使用不同濃度

2、的Nogo一66蛋白與視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞共刺激分子Ox40L表達(dá)情況及小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)變化與Nogo66蛋白濃度效應(yīng)的關(guān)系；二、Nogo一66蛋白對(duì)SD大鼠免疫功能的影響使用Nogo一66蛋白接種sD大鼠，分析接種后SD大鼠的脾淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期，及特異性血清抗體濃度改變及其時(shí)間一效應(yīng)關(guān)系。觀察Nogo66蛋白不同接種濃度SD大鼠是否出現(xiàn)EAE及EAu改變，以及實(shí)質(zhì)性臟器的組織結(jié)構(gòu)改變。三、慢性高眼壓對(duì)SD大鼠視網(wǎng)膜小

3、膠質(zhì)細(xì)胞免疫功能研究建立SD大鼠慢性高眼壓模型，免疫組織化學(xué)方法觀察高眼壓過程中視網(wǎng)膜專職抗原提呈細(xì)胞一視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞的功能特征。四、Nogo66蛋白對(duì)慢性高眼壓SD大鼠視網(wǎng)膜RGCs保護(hù)作用的研究按照皮下接種Nogo一66蛋白后時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，進(jìn)行眼玻璃體內(nèi)追加免疫，檢測(cè)慢性高眼壓SD大鼠的視網(wǎng)膜免疫特征改變。并通過四甲基葡聚糖羅丹明標(biāo)記計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及視覺誘發(fā)電位檢測(cè)視覺功能，分析判斷Nogo一66蛋白的對(duì)慢性高眼壓SD大鼠視

4、網(wǎng)膜的免疫保護(hù)作用。主要結(jié)果及結(jié)論如下：一、Nogo66蛋白對(duì)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞具有免疫原性經(jīng)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)證明；Nogo一66蛋白能夠激活視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞使體積增大，當(dāng)Nogo66蛋白濃度至2000ng／ml出現(xiàn)巨噬細(xì)胞樣改變。并刺激視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)表面黏附分子0x40L，Nogo一66蛋白質(zhì)對(duì)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞具有的免疫原性。二、Nogo一66蛋白能夠促進(jìn)SD大鼠特異性免疫反應(yīng)Nogo一66蛋白接種sD大鼠后，采用流式細(xì)胞術(shù)分

5、析SD大鼠脾淋巴細(xì)胞的細(xì)胞周期，結(jié)果顯示：Nogo一66蛋白能夠刺激大鼠產(chǎn)生致敏T淋巴細(xì)胞，提高血清Nogo66蛋白特異性IgG抗體濃度。另外，在有效濃度刺激下，正常SD大鼠大腦、小腦、脊髓及各實(shí)質(zhì)臟器均未發(fā)生實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(xperimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)特征性改變、視網(wǎng)膜無實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性色素層炎(experimentalallergicuveitis，EAU)發(fā)生。三、慢