利用免疫蛋白組學(xué)技術(shù)篩選和鑒定胃癌腫瘤相關(guān)抗原及血清腫瘤標(biāo)記物.pdf

1、背景與目的：腫瘤相關(guān)抗原是潛在的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)腫瘤的早期篩選具有重要價(jià)值。因此，系統(tǒng)、全面地研究腫瘤相關(guān)抗原對(duì)于腫瘤標(biāo)志物的篩選具有重要意義。本研究采用免疫蛋白組學(xué)技術(shù)(Immunoproteomics)篩選胃癌腫瘤相關(guān)抗原及血清腫瘤標(biāo)記物。 方法：取15例人胃癌組織，應(yīng)用雙向凝膠電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)技術(shù)對(duì)同一胃癌患者的胃癌組織(2份)、癌旁組織及遠(yuǎn)端正常胃粘膜組織的細(xì)

2、胞總蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳后獲得4張雙向凝膠，其中一塊2-DE凝膠是銀染顯色的胃癌組織細(xì)胞蛋白作為平行膠，其余三塊2-DE凝膠經(jīng)半干轉(zhuǎn)印將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜上，分別與胃癌患者的自身血清進(jìn)行免疫印跡分析，建立2DE/Western blot反應(yīng)圖譜。 經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像分析識(shí)別差異反應(yīng)的蛋白點(diǎn)，然后與平行膠比較確定相應(yīng)的差異反應(yīng)蛋白質(zhì)點(diǎn)，采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)

3、譜(Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight MassSpectrometry，MALDI-TOF MS)對(duì)相應(yīng)的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行鑒定，篩選和鑒定胃癌相關(guān)腫瘤抗原。 結(jié)果： 1.獲得了分辨率較高且匹配性較好的人胃癌組織總蛋白2-DE圖譜，15塊膠的平均點(diǎn)數(shù)為839±24，匹配點(diǎn)數(shù)為752±2l，平均匹配率為89.6％。 2.人胃癌組織、癌

4、旁組織及遠(yuǎn)端正常胃粘膜組織分別與患者自身血清進(jìn)行免疫印跡分析，獲得分辨率較高的Western blotting反應(yīng)圖譜，圖像分析共識(shí)別23個(gè)差異反應(yīng)的蛋白質(zhì)，在平行膠上找到了相應(yīng)匹配的差異反應(yīng)蛋白質(zhì)點(diǎn)，質(zhì)譜鑒定分析、鑒定出17個(gè)蛋白點(diǎn)，分別為錳超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD)、膽綠素還原酶B(biliverdin reductase B,BVR B)、α-烯醇酶及其異構(gòu)體烯醇酶-

5、1、6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶、中間絲波形蛋白異構(gòu)體、核有絲分裂器蛋白1異構(gòu)體、熱休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)、絲狀肌動(dòng)成帽蛋白α-1亞單位、甘油醛-3-磷酸脫氫酶、核不均-核糖核蛋白A2/B1(Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1，hnRNP A2/B1)、微管蛋白β5、纖維蛋白素原β-鏈前蛋白原、醛脫氫酶9A1、鳥苷酸結(jié)合蛋白β-2亞單位、抗

6、體酶、平滑肌鈣結(jié)合蛋白1。這些蛋白與細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、細(xì)胞代謝、細(xì)胞周期調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等有關(guān)。 結(jié)論： 1.獲得了分辨率較高且匹配性較好的人胃癌組織總蛋白2-DE圖譜。 2.首次應(yīng)用人胃癌組織、胃癌癌旁組織及遠(yuǎn)端正常胃粘膜組織蛋白與胃癌患者自身血清反應(yīng)獲得了分辨率較高的2-DE/Western blot反應(yīng)圖譜。 3.成功鑒定17個(gè)胃癌相關(guān)抗原，為進(jìn)一步篩選用于胃癌診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的胃癌分子標(biāo)志物奠定了堅(jiān)