應用蛋白質組學技術篩選和鑒定卵巢癌腫瘤抗原.pdf

1、卵巢癌是惡性腫瘤中導致婦女死亡的主要原因，早期診斷卵巢癌可對患者的預后產生影響，故腫瘤抗原的篩選在卵巢癌的早期診斷中顯得尤為重要，并可為卵巢癌免疫治療提供新的治療靶點及新的疫苗設計方案。蛋白質組(proteome)的概念于1995年提出后，蛋白質組學(proteomics)就迅速成為了生命科學研究的一個新前沿，相應的技術也在迅猛發(fā)展并在各個研究領域發(fā)揮著重要作用。在腫瘤抗原篩選方面，噬菌體抗體庫技術、核糖體展示技術和血清學篩選重組cDN

2、A表達文庫(SEREX)技術等作為常用的方法已得到廣泛應用。本研究旨在將蛋白質組學技術應用到卵巢癌腫瘤抗原的篩選中，創(chuàng)建一種新的篩選腫瘤抗原方法和技術路線。 方法：收集初治的卵巢癌患者血清，應用蛋白質印跡(Westernblot)技術對卵巢癌患者血清進行初步對比分析，篩選出免疫反應強烈、差異顯著的患者血清，利用該患者血清與人卵巢癌細胞株SKOV3裂解物反應，采用免疫沉淀(immunoprecipitation，IP)技術富集抗原

3、、聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，與正常對照血清的免疫沉淀樣品進行對比分析，獲得差異蛋白條帶，然后對差異蛋白條帶進行質譜(massspectrometry，MS)鑒定和生物信息學分析。 結果：采用蛋白質印跡技術篩選到兩個差異顯著的卵巢癌患者血清，經免疫沉淀、聚丙烯酰胺凝膠電泳與正常血清免疫沉淀樣品比較，發(fā)現在接近66kDa及42kDa的位置處有差異蛋白條帶，經質譜鑒定、生物信息學分析得到四個蛋白質：熱休克蛋白70(heatshockp