應用血清蛋白質組技術篩選鼻咽癌相關性抗原.pdf

1、鼻咽癌是東南亞及我國南方幾省常見的腫瘤，由于其臨床癥狀不明顯，鼻咽癌的早期診斷仍然比較困難。為了尋找新的鼻咽癌診斷標志物，我們采用血清蛋白質組學方法，對可以引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應的腫瘤相關性抗原進行了篩選。首先，用二維電泳技術一次性分離了鼻咽癌組織中上千個蛋白質點，然后，將這些蛋白質點轉移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，再分別與鼻咽癌患者自身血清及正常對照血清進行Western blot反應，尋找那些與多數(shù)鼻咽癌患者血清發(fā)生

2、抗原一抗體反應，而沒有或很少與對照血清發(fā)生抗原一抗體反應的蛋白質點進行質譜鑒定。在研究中，我們鑒定了13個這樣的蛋白質，它們至少在21[％]的鼻咽癌患者血清中存在相應抗體。其中，抗角蛋白19(CKl9)的抗體在47.4[％]的患者血清中能檢測到，但卻沒有在一例對照血清中檢測到。隨后，我們用免疫沉淀與 Westernblot反應相結合的方法，將鼻咽部低分化鱗癌細胞株CNE2中CKl9沉淀下來，以CKl9作為抗原，對另外30例鼻咽癌患者血清

3、，23例其他腫瘤患者血清及20例正常血清中CKl9抗體的存在情況進行了研究，結果在13例鼻咽癌患者血清、1例其他腫瘤患者血清和1例正常血清中檢測到了抗原一抗體反應，這說明抗CKl9抗體具有鼻咽癌特異性。為了初步探討CKl9誘導鼻咽癌患者發(fā)生體液免疫的原因，我們用免疫組化和Western blot反應檢測了CKl9在鼻咽癌組織與鼻咽部正常粘膜上皮組織中的表達情況，發(fā)現(xiàn)與鼻咽部正常粘膜上皮組織相比，CKl9在鼻咽癌組織中表達明顯升高。我們推

4、測過表達可能是CKl9引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應的原因之一。除了CKl9外，我們對另外兩個分別在36.8％和47.4％的鼻咽癌患者血清中存在相應抗體的蛋白質Rho—GDI和EBPl的表達水平也進行了檢測，發(fā)現(xiàn)Rho-GDI在鼻咽癌組織和鼻咽部正常粘膜上皮組織中的表達沒有差別，而EBPl則在65％的鼻咽癌組織中檢測到表達升高。本研究篩選到了CKl9等13個能夠較特異地引起鼻咽癌患者體內(nèi)發(fā)生體液免疫反應的腫瘤相關性抗原，為鼻咽癌早期