運(yùn)用血清學(xué)蛋白質(zhì)組分析方法尋找乳腺癌相關(guān)抗原.pdf

1、目的:運(yùn)用血清學(xué)蛋白質(zhì)組分析方法尋找乳腺癌相關(guān)抗原。
　　方法:體外培養(yǎng)乳腺癌T-47D細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白;T-47D細(xì)胞總蛋白經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分離后轉(zhuǎn)膜，用對(duì)照血清和患者血清作為一抗進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡(Western blot)分析，尋找差異反應(yīng)蛋白條帶;T-47D細(xì)胞總蛋白經(jīng)雙向電泳技術(shù)(2-DE)分離后轉(zhuǎn)膜，分別用20例對(duì)照血清和20例患者血清作為一抗進(jìn)行Western blot分析，將

2、每一個(gè)蛋白點(diǎn)與對(duì)照血清和患者血清發(fā)生免疫反應(yīng)的頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，找出具有顯著性差異的蛋白質(zhì)點(diǎn)，該蛋白點(diǎn)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析鑒定，并經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫檢索。
　　結(jié)果:SDS-PAGE的Western blot結(jié)果顯示T-47D細(xì)胞總蛋白與患者血清反應(yīng)的蛋白分子量在22kDa-94kDa的范圍內(nèi);對(duì)T-47D細(xì)胞總蛋白進(jìn)行3次雙向電泳重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，獲得了分辨率高、重復(fù)性好的雙向電泳圖譜，蛋白質(zhì)點(diǎn)主要集中在分子量

3、為20.0kDa-94kDa和等電點(diǎn)pI4.0-7.0的范圍內(nèi);篩選出10個(gè)差異蛋白點(diǎn)，經(jīng)質(zhì)譜鑒定為HSP90、HSP60、HSP27、ER-60、PGAM1、P4HB、EEF1G、核糖體蛋白P0、hypothetical protein和unnamed protein product。
　　結(jié)論:乳腺癌患者血清中的抗體表達(dá)水平發(fā)生改變;篩選出的10個(gè)差異表達(dá)的蛋白分別涉及到分子伴侶、能量代謝、細(xì)胞信號(hào)等多種功能相關(guān)的蛋白質(zhì)，這可