應(yīng)用自身抗體篩選和鑒定乳腺腫瘤相關(guān)抗原.pdf

1、目前應(yīng)用于乳腺癌檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物只有有限的幾個(gè)，不但敏感性和特異性都不高，而且對(duì)乳腺癌早期檢測(cè)都沒(méi)有很好的效果。應(yīng)用自身抗體技術(shù)篩選得到的乳腺腫瘤相關(guān)蛋白不僅有助于提高乳腺癌檢測(cè)的敏感性和特異性，還能在很大程度上填補(bǔ)乳腺癌早期檢測(cè)的空白。
　　 方法：
　　 運(yùn)用生物淘洗富集技術(shù)，用正常人和乳腺癌病人血清從一個(gè)乳腺癌cDNA T7噬菌體文庫(kù)中篩選腫瘤相關(guān)蛋白。經(jīng)生物淘洗，用噬菌斑轉(zhuǎn)印分析和免疫化學(xué)檢測(cè)方法得到腫瘤相關(guān)蛋白

2、。再用PCR和測(cè)序的方法分析這些潛在的腫瘤相關(guān)噬菌體克隆，尋找在開(kāi)放閱讀框架內(nèi)的序列，通過(guò)BLAST比對(duì)識(shí)別出這些噬菌體表達(dá)蛋白。后用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）的方法對(duì)87個(gè)乳腺癌病人和87個(gè)正常人血清樣品，檢測(cè)每一個(gè)開(kāi)放閱讀框架內(nèi)的噬菌體表達(dá)蛋白的自身抗體。為評(píng)估單個(gè)標(biāo)志物和多標(biāo)志物聯(lián)合診斷的準(zhǔn)確率，使用了邏輯回歸模型和留一交叉驗(yàn)證方法。最后又從實(shí)驗(yàn)室保存的經(jīng)四輪生物淘洗后的肺癌cDNA T7噬菌體文庫(kù)中用同樣的方法篩選、鑒定和分析乳

3、腺癌相關(guān)蛋白。
　　 結(jié)果：
　　 淘洗富集后我們得到了100個(gè)乳腺腫瘤相關(guān)噬菌體克隆，序列分析表明其中6個(gè)不同的噬菌體表達(dá)蛋白在閱讀框架之內(nèi)。BLAST比對(duì)結(jié)果與ASB-9，SERAC-1和RELT這3個(gè)蛋白最為匹配。應(yīng)用自身抗體，對(duì)這6個(gè)噬菌體表達(dá)蛋白的ELISA分析結(jié)果顯示，其中3個(gè)克隆在統(tǒng)計(jì)學(xué)上能顯著區(qū)分出病人和正常人。用87份乳腺癌病人血清和87份正常人血清對(duì)這3個(gè)噬菌體表達(dá)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證，邏輯回歸模型聯(lián)合檢測(cè)的

4、敏感性達(dá)到80％，特異性達(dá)到100％；留一交叉驗(yàn)證3者聯(lián)合的預(yù)測(cè)值敏感性和特異性分別達(dá)到76.5％和82.4％。后從肺癌文庫(kù)中篩選得到了43個(gè)乳腺腫瘤相關(guān)噬菌體克隆，經(jīng)PCR挑出電泳條帶明顯不一樣的10個(gè)產(chǎn)物去測(cè)序。測(cè)序結(jié)果通過(guò)NCBI核酸數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)得到2條開(kāi)放閱讀框架內(nèi)蛋白序列信息。應(yīng)用自身抗體，對(duì)表達(dá)HSPA4L和RINT-1這兩個(gè)蛋白噬菌體的ELISA分析結(jié)果顯示，這2個(gè)克隆在統(tǒng)計(jì)學(xué)上能顯著區(qū)分出病人和正常人。隨機(jī)選取87份乳腺癌

5、病人血清和87份正常人血清對(duì)這兩個(gè)噬菌體表達(dá)蛋白進(jìn)行驗(yàn)證，邏輯回歸模型聯(lián)合檢測(cè)的敏感性達(dá)到94％，特異性達(dá)到100％；留一交叉驗(yàn)證兩者聯(lián)合的預(yù)測(cè)值敏感性和特異性分別達(dá)到84.5％和95％。ROC曲線(xiàn)分析和留一法都表明多個(gè)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的價(jià)值要高于單標(biāo)志物，意示著多標(biāo)志物聯(lián)合在診斷中的重要性。
　　 結(jié)論：
　　 對(duì)乳腺癌來(lái)說(shuō)，血清自身抗體是其早期檢測(cè)和診斷的一種有效方法，而且多抗體聯(lián)合應(yīng)用可實(shí)現(xiàn)更高的診斷準(zhǔn)確率。下一步就