腮腺多形性腺瘤及惡性腫瘤的唾液蛋白組學(xué)初探.pdf

1、目前臨床上已經(jīng)廣泛應(yīng)用化驗(yàn)?zāi)蛞旱润w液中的成分來進(jìn)行疾病診斷。唾液是人體的一種外分泌液，主要由三對(duì)大唾液腺（腮腺、頜下腺、舌下腺）所分泌。唾液中的有機(jī)、無機(jī)成分非常豐富，中含有一千多種蛋白質(zhì)和大量的無機(jī)鹽。唾液能夠通過許多的無創(chuàng)性手段簡便快速獲取，然而，應(yīng)用唾液進(jìn)行常規(guī)的疾病診斷目前還沒有實(shí)現(xiàn)。有研究證實(shí)，當(dāng)機(jī)體存在系統(tǒng)性疾病或者口腔局部病變時(shí)，許多唾液蛋白的表達(dá)都將產(chǎn)生變化，例如:糖尿病、舍格倫綜合征、牙周炎以及口腔鱗狀細(xì)胞癌。那么，腮

2、腺作為分泌唾液的三大唾液腺之一，當(dāng)其發(fā)生腫瘤時(shí)，唾液蛋白成分理論上會(huì)產(chǎn)生變化，這些改變對(duì)于腮腺腫瘤的診斷是否有參考價(jià)值呢？
　　為了探究腮腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma，PMA)和腮腺惡性腫瘤(parotid malignant tumors，PMT)存在時(shí)腮腺所分泌的唾液蛋白的表達(dá)異常，本實(shí)驗(yàn)使用液相色譜電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)譜(Liquid chromatographyelectrospray ionizati

3、on tandem mass spectrometry, LC-ESI-MS/MS)技術(shù)來對(duì)腮腺腫瘤患者的唾液蛋白進(jìn)行蛋白組學(xué)對(duì)比分析，并使用ELISA技術(shù)進(jìn)行差異蛋白驗(yàn)證。
　　研究目的:
　　1.通過測(cè)定不同腮腺腫瘤患者及正常人群唾液蛋白組，找到能夠反應(yīng)腮腺腫瘤存在的蛋白標(biāo)志物。2.證實(shí)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)所鑒定的重要蛋白在唾液中真實(shí)存在。3.通過比較不同腮腺腫瘤患者唾液蛋白組分，找到具有代表性的標(biāo)志物，輔助術(shù)前明確腫瘤良惡性或

4、腫瘤性質(zhì)。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　分別采集腮腺多形性腺瘤、腮腺惡性腫瘤及正常人群的腮腺唾液標(biāo)本各5例，使用質(zhì)譜分析方法篩選差異表達(dá)蛋白。腫瘤組采集患側(cè)唾液樣本，正常對(duì)照組隨機(jī)采集一側(cè)，提取、純化唾液蛋白，超濾濃縮、裂解、脫鹽后，進(jìn)行質(zhì)譜分析檢測(cè)，分析數(shù)據(jù)找出差異蛋白后，加大樣本量，使用ELISA試劑盒選擇性鑒定多形性腺瘤組顯著性增高的galectin-7。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　總共有21個(gè)蛋白在三組樣本間的表達(dá)量存

5、在1.5倍或更大改變。其中g(shù)alectin-7在PMA組中的表達(dá)量顯著性高于PMT組及對(duì)照組;SPARCLl(Hevin)在PMT組中的表達(dá)量顯著性低于PMA組及對(duì)照組;Azurocidin及ARPC4-TTLL3在PMA組和PMT組中的表達(dá)量顯著性高于對(duì)照組;Cystatin C和Lipocalin l在PMA組和PMT組中的表達(dá)量則顯著性低于對(duì)照組。
　　進(jìn)一步對(duì)18個(gè)PMA樣本、6個(gè)正常樣品及5個(gè)惡性腫瘤樣本中的galect

6、in-7進(jìn)行ELISA檢測(cè)，多個(gè)獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示:唾液中g(shù)alectin-7含量在多形性腺瘤組中較對(duì)照組(P=0.002)及惡性腫瘤組(P=0.008)均顯著性增高，而對(duì)照組與惡性腫瘤組之間無顯著性差異(P=0.193)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　1.質(zhì)譜檢測(cè)能夠特異性地篩選出腮腺腫瘤患者唾液中有顯著性改變的蛋白。2.通過質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)及ELISA檢測(cè)均證明，唾液galectin-7在多形性腺瘤組中表達(dá)明顯