腺苷A2A受體介導(dǎo)的效應(yīng)對小鼠慢性低灌注白質(zhì)損傷的影響和精神運動行為的調(diào)控作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分、腺苷A2A受體介導(dǎo)的效應(yīng)對小鼠慢性低灌注白質(zhì)損傷的影響
　　背景：慢性低灌注性白質(zhì)損傷的主要病理改變?yōu)榘踪|(zhì)神經(jīng)纖維髓鞘潰變、軸索變性、小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞增生，而其分子病理機制仍然不明確，對于慢性腦血流低灌注導(dǎo)致的腦組織能量代謝和神經(jīng)活性物質(zhì)代謝障礙通過哪些途徑造成以白質(zhì)損傷為主的病理損害仍然缺乏清楚認(rèn)識。以往研究發(fā)現(xiàn)，慢性腦血流低灌注造成的白質(zhì)損傷，同時伴隨有白質(zhì)炎細(xì)胞浸潤或增生、某些

2、炎性因子表達(dá)增加以及NO合成增加等，提示白質(zhì)損傷與炎性病理過程有關(guān)。腺苷是能量代謝的中間產(chǎn)物，也是中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)調(diào)質(zhì)。腺苷與其受體（A1、A2A、A2B和A3）結(jié)合后調(diào)節(jié)機體重要的生理活動，并參與多種致病因素引起的疾病過程。其中A2A受體參與機體多種生理活動的調(diào)節(jié)和某些疾病的病理過程，在某些疾病的動物模型實驗研究中發(fā)現(xiàn)以A2A受體為靶點的藥物治療效應(yīng)較明確，因此格外受到重視。研究已發(fā)現(xiàn)阻斷腺苷A2A受體對急性缺血性腦損傷的保護作

3、用是由于抑制了細(xì)胞外谷氨酸濃度的異常升高，從而降低谷氨酸對神經(jīng)組織的興奮性毒性。然而，本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)，與在急性腦缺血動物模型觀察到的結(jié)果相反，腺苷A2A受體基因敲除加重慢性低灌注導(dǎo)致的白質(zhì)纖維損傷，白質(zhì)區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞增生及活化，外周炎細(xì)胞浸潤。研究結(jié)果表明腺苷A2A受體介導(dǎo)的效應(yīng)是影響慢性低灌注白質(zhì)損傷結(jié)局的重要因素，阻斷腺苷A2A受體加重慢性低灌注白質(zhì)損傷，但對其機制仍然不清楚。本研究在慢性低灌注小鼠模型觀察了腺苷A2A受體激動

4、劑對白質(zhì)損傷、白質(zhì)區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞增生和炎細(xì)胞浸潤的影響，試圖進一步確定腺苷A2A受體介導(dǎo)的效應(yīng)與白質(zhì)損傷及其炎性病理過程的關(guān)系。
　　方法：參照Shibata等方法，采用內(nèi)徑為0.18mm的微型彈簧圈套雙側(cè)頸總動脈建立C56BL/6小鼠慢性腦血流低灌注模型，激光多普勒血流儀監(jiān)測小鼠建模前后局部腦血流的變化。建模后每日給予腺苷A2A受體激動劑CGS21680（0.5mg/kg/d,ip）直至各觀察截止時點，相同容積載體溶液作為對照。

5、建模后25d，采用Morris水迷宮評價小鼠認(rèn)知功能損害情況。分批于建模后14d、30d和45d取腦標(biāo)本冰凍連續(xù)冠狀位切片，Kluver-Barrera染色和Bielschowsky銀染，抗MBP、抗CD11b、抗CD3和抗LY-6G免疫組織化學(xué)染色，觀察在建模后不同時點白質(zhì)區(qū)域的神經(jīng)纖維損傷程度、小膠質(zhì)細(xì)胞增生以及外周炎細(xì)胞浸潤情況。
　　結(jié)果：
　?、俨捎锰刂莆⑿蛷椈扇μ仔∈箅p側(cè)頸總動脈成功建立慢性腦血流低灌注模型，圈套

6、雙側(cè)頸總動脈后局部腦血流下降29±5.38％，建模后15d、30d和45d組織病理學(xué)觀察證實白質(zhì)神經(jīng)纖維稀疏、纖維空隙增加和局部空泡形成；
　?、贛orris水迷宮檢測發(fā)現(xiàn)，與載體溶液對照組小鼠比較，接受腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小鼠的潛伏期明顯延長，但穿越平臺次數(shù)無顯著差異；
　　③各時點組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組白質(zhì)損傷程度較載體溶液對照組減輕；
　?、芙：?5

7、d組織病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，兩組動物腦內(nèi)白質(zhì)區(qū)域均可見胞體增大變圓、突起變短的活化小膠質(zhì)細(xì)胞，但腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯較少；
　?、萁：?0d和45d，免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)載體溶液對照組小鼠胼胝體可見散在分布的CD3陽性淋巴細(xì)胞，而在腺苷A2A受體激動劑CGS21680處理組小鼠未見到CD3陽性淋巴細(xì)胞分布；
　?、藿：髢山M動物胼胝體、內(nèi)囊和視束等白質(zhì)區(qū)域均未見到LY-6G陽性的中性粒細(xì)胞

8、。
　　結(jié)論：
　?、傧佘誂2A受體激動劑CGS21680抑制小鼠運動活性；
　?、谙佘誂2A受體激動劑CGS21680減輕慢性腦血流低灌注造成的白質(zhì)損傷；
　?、巯佘誂2A受體激動劑CGS21680抑制慢性腦血流低灌注誘導(dǎo)的白質(zhì)區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞增生和活化；
　?、芟佘誂2A受體激動劑CGS21680抑制慢性腦血流低灌注誘導(dǎo)的白質(zhì)區(qū)域淋巴細(xì)胞浸潤；⑤腺苷A2A受體激動劑減輕慢性腦血流低灌注造成的白質(zhì)損傷與其抑

9、制炎性病理過程有關(guān)。
　　第二部分、腺苷A2A受體介導(dǎo)的效應(yīng)對小鼠精神運動和情緒行為的調(diào)控作用
　　目的：探討腺苷A2A受體基因敲除、藥物激活和抑制腺苷A2A受體對小鼠運動活性、焦慮和抑郁樣行為的影響。
　　方法：實驗分為腺苷A2A受體基因敲除組（adenosine A2A receptor knock-out，A2AKO）及同窩野生型（wild-type，WT）小鼠對照組、給予野生型C57BL/6小鼠腺苷A2A受體激

10、動劑CGS21680（0.5 mg/kg，ip）和拮抗劑SCH58261（2mg/kg,ip）及其載體溶液對照組，分別進行曠場實驗、高架十字迷宮實驗和強迫游泳實驗，測定各組小鼠的運動活性、焦慮和抑郁樣行為。
　　結(jié)果：
　　①與載體溶液對照組比較，CGS21680組曠場總運動路程縮短和在周邊區(qū)域的滯留時間延長（P＜0.01），進入高架十字迷宮開臂的次數(shù)及在開臂的滯留時間減少（P＜0.01），強迫游泳的累計不動時間延長（P＜0

11、.001）；
　?、谂c載體溶液對照組比較，SCH58261組曠場總運動路程和中心區(qū)域活動路程延長（P＜0.001），強迫游泳的累計不動時間縮短（P＜0.01），高架十字迷宮各項指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）；
　?、叟cWT組比較，A2AKO組曠場總運動路程縮短（P＜0.001）和在周邊區(qū)域的滯留時間延長（P＜0.05），進入高架十字迷宮開臂的次數(shù)及在開臂的滯留時間減少（P＜0.05），強迫游泳的累計不動時間無顯著差異（P＞0