小鼠心肌梗死模型的建立及Caveolin3與腺苷A2A受體的作用.pdf

1、目的:1、建立心肌梗死模型的方法中，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法效果較好，模型較穩(wěn)定。但是心肌梗死模型的建立難度較大，成活率不高。主要的死亡原因有(1)麻醉后及術(shù)中的呼吸維持(2)開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈(3)胸腔負(fù)壓的維持。我們經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的探索之后，對(duì)于結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支建立小鼠心肌梗死模型的方法進(jìn)行了進(jìn)一步的改良，明顯提高存活率。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠心肌梗死模型的建立方法進(jìn)行進(jìn)一步探討。
　　2、已有的研究表明腺苷A2A受體對(duì)心血管系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)作用

2、，Caveolin3對(duì)心臟也起到保護(hù)作用，但是在急性心肌梗死時(shí)，兩者之間的關(guān)系如何，未見(jiàn)系列報(bào)道。因此，本研究在小鼠心肌梗死模型中，探討Caveolin3與腺苷A2A受體的相互作用。
　　方法:取小鼠的一段尾巴，用PCR方法擴(kuò)增小鼠DNA，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法鑒別出腺苷A2A基因敲除小鼠及野生型小鼠。實(shí)驗(yàn)分為腺苷A2A基因敲除組和野生型組，分別進(jìn)開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支建立小鼠心肌梗死模型。術(shù)前術(shù)后予以心電圖檢查，用雙抗夾心EL

3、ISA的方法檢測(cè)術(shù)前及術(shù)后24小時(shí)血清cTnⅠ濃度。通過(guò)術(shù)中肉眼觀察、比較心電圖及cTnⅠ濃度的變化，對(duì)心肌梗死模型是否成功進(jìn)行評(píng)價(jià)。術(shù)后觀察14天，采集心臟標(biāo)本。用western blot方法檢測(cè)兩組Caveolin3表達(dá)，并比較兩組之間的變化。所有的資料通過(guò)統(tǒng)計(jì)軟件SPSS14.0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。
　　結(jié)果:(1)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示分子量最小的條帶是180bp，分子量最大的為330bp。僅表達(dá)180bp為野生型小鼠

4、;僅表達(dá)330bp為腺苷A2A基因敲除小鼠。(2)小鼠心肌梗死模型建立的過(guò)程中，肉眼觀察到左室前壁失去光澤，呈青紫色或是暗灰色，心臟收縮功能明顯減低。術(shù)后1min模擬Ⅱ?qū)?lián)的心電圖與術(shù)前比較，ST段明顯抬高，術(shù)后15min抬高的ST段回到基線水平，術(shù)后14天，病理性Q波形成。野生型小鼠手術(shù)組術(shù)后24小時(shí)cTnⅠ濃度明顯高于術(shù)前(P＜0.01)，術(shù)后14天幾乎回到術(shù)前水平。假手術(shù)組術(shù)后24小時(shí)cTnⅠ濃度高于術(shù)前(P＜0.05)，但升高的

5、幅度較手術(shù)組術(shù)后24小時(shí)明顯減低。腺苷A2A基因敲除組術(shù)后24小時(shí)cTnⅠ濃度明顯高于術(shù)前(P＜0.01)，術(shù)后14天幾乎回到術(shù)前水平。(3)野生型小鼠心肌梗死組Caveolin3的累積光密度值(IOD)為1.614±0.120，腺苷A2A受體敲除小鼠心肌梗死組Caveolin3的累積光密度值(IOD)為1.187±0.113，后者明顯低于前者(P＜0.01)。
　　結(jié)論:(1)開(kāi)胸結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支的方法可成功建立小鼠心肌梗死模