冠狀動脈結(jié)扎法建立小鼠心肌梗死模型的病理及心功能變化的觀察.pdf

1、心肌梗死(myocardial infarction，MI)在臨床上的發(fā)病率及死亡率非常高，已成為威脅人類健康的重大疾病之一。對MI發(fā)病機制的研究是提高治愈率和開展新療法的重要基礎(chǔ)。而動物實驗是研究進入臨床階段前的必需過程。因此，選擇合適的動物和接近于臨床MI發(fā)生的模型復褂方法是研究的前提。國內(nèi)尚未見到應用冠狀動脈結(jié)扎(coronary artery ligation，CAL)法制作小鼠MI模型，本文采用CAL法制作小鼠MI模型并觀察其

2、病理與心功能變化，探討MI發(fā)病機制，為進一步的實驗研究奠定基礎(chǔ)。 方法 1．動物分組： 根據(jù)研究目的，實驗動物共分13組；其中12組需手術(shù)制作模型，合稱手術(shù)組，另一組為假手術(shù)組。手術(shù)組分為梗死后30min組、1h組、2h組、4h組、1d組、2d組、3d組、5d組、7d組、10d組、14d組、28d組。為滿足每組8只的要求，先后有110只動物隨機進入手術(shù)組(96只)與假手術(shù)組(14只) 2．動物模型制作：

3、 小鼠稱重后，皮下注射阿托品抑制呼吸道分泌物，30min后，氯胺酮80mg/Kg腹腔注射，麻醉滿意后置于手術(shù)臺上，四肢及皮下連接心電圖電極，記錄標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖，氣管插管接呼吸機，進行機械通氣。小鼠右側(cè)臥位固定于臺上，左前胸去毛，消毒鋪巾，沿肋間隙方向于胸骨左旁第3肋間隙切開皮膚，逐層分離皮下組織、肌肉，撐開進胸，剪開心包，在左心耳下緣與肺動脈圓錐間可見左冠狀動脈前降支起始部，用6-0尼龍縫線結(jié)扎中1/3，待動物的數(shù)十次心動周期

4、后，收線打結(jié)，以心電圖心肌梗死的特征性改變?yōu)橹笜舜_定模型復制成功。觀察數(shù)分鐘后，增大潮氣量，提高呼吸頻率，充分擴張肺后徹底止血，逐層關(guān)胸，關(guān)胸過程中于切口內(nèi)放置引流管。待小鼠自主呼吸恢復，拔出氣管插管。術(shù)后肌注青霉素2萬U。假手術(shù)組僅在左心耳下緣與肺動脈圓錐間左冠狀動脈前降支同樣位置穿線而不結(jié)扎，余操作同手術(shù)組。 3．心臟超聲檢查： 采用美國HPSONOS 5500型超聲顯像儀，相控陣探頭頻率7．5MHz。分別于結(jié)扎冠狀

5、動脈前和結(jié)扎后8d測量室間隔(IVS)、左室舒張末內(nèi)徑(LVDd)、左室收縮末內(nèi)徑(LVDs)、左室后壁(PW)、短軸縮短率(Fs)、射血分數(shù)(EF)。并取左室長軸切面行M型心臟超聲檢查。所有資料均經(jīng)錄像后脫機分析，計數(shù)資料連續(xù)測量3個心動周期取平均值。 4．組織病理切片： 剪下心臟，用生理鹽水洗凈血塊，浸泡于10％甲醛溶液中固定24h，經(jīng)過結(jié)扎點位置橫斷心臟，制作石蠟切片。 結(jié)果 1．心電圖及大體表現(xiàn)

6、 假手術(shù)組動物均合格，心電圖及術(shù)中肉眼觀正常。手術(shù)組結(jié)扎瞬間心電圖表現(xiàn)為一過性ST段弓背向上抬高。肉眼觀可見遠端心肌活動度減弱或消失，左室前壁蒼白后紫紺。1～20 min后出現(xiàn)不同程度的ST段弓背向上抬高，無或僅有短暫的心律失常。2周后再次復查心電圖，手術(shù)組表現(xiàn)有①ST段弓背向上抬高；②QRS波群幅度降低；③ST段低平等。開胸后肉眼觀為左室前外側(cè)壁可見不規(guī)則形心肌變白區(qū)，心肌活動減弱或消失，甚至有反常運動。術(shù)后4周開胸并復查心

7、電圖，手術(shù)組動物心電圖與假手術(shù)組相比無明顯變化，但肉眼觀有不同程度的心肌變白區(qū)的擴大。 2．心臟超聲檢查 小鼠結(jié)扎后，左室舒張末、收縮末內(nèi)徑增大；短軸縮短率、射血分數(shù)降低。 3．病理切片 假手術(shù)組動物心臟結(jié)構(gòu)清晰，心肌纖維排列整齊，未見斷裂、變性及壞死，間質(zhì)內(nèi)未見炎細胞浸潤，心內(nèi)膜、心外膜亦未見異常改變；心肌梗死后1h心肌內(nèi)尚無炎癥細胞浸潤；心肌梗死后3d可見大量的炎性細胞浸潤及心肌細胞膜不完整表現(xiàn)；5

8、d時梗死相關(guān)區(qū)的炎癥反應最強，可見大量中性粒細胞浸潤，心肌纖維排列紊亂；7d可見心肌纖維斷裂、心肌細胞壞死；14d時，梗死區(qū)心肌纖維紅染，間隙增寬，橫紋消失，核固縮或溶解，梗死區(qū)邊緣可見充血，出血帶及不等量中性粒細胞浸潤；28d時心梗區(qū)鏡下基本全部是纖維母細胞和纖維細胞以及致密的膠原纖維束，呈束狀或平行狀排列，膠原纖維束之間幾無殘存的存活心肌組織，炎性細胞浸潤已少見。 結(jié)論：1．冠狀動脈結(jié)扎法可成功建立小鼠心肌梗死模型。2．病理