IBV M41人工感染SPF雞靶器官中固有免疫相關因子應答的動態(tài)觀察.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Infectious bronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)感染引起的一種急性呼吸道傳染病，是危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疾病之一。IBV血清型較復雜，相互之間的交叉保護效果有限，傳統(tǒng)的IBV疫苗防控策略受到挑戰(zhàn)。因此，進一步研究IBV致病機理和免疫機制，對于IB防控具有重大意義。
　　固有免疫（天然免疫）反應是宿主抵御病毒感染的第一道防線，

2、是一種有效的抗病毒機制，其主要通過模式識別受體(Patternrecognition receptor, PRR)感知入侵的危險信號后產(chǎn)生一系列效應，抵抗外來病原體的入侵。分泌型免疫球蛋白A（SecretaryimmunoglobulinA，SIgA）是天然黏膜免疫中的重要因子。目前關于IBV感染對SIgA、Toll樣受體3（Toll like receptor3，TLR3）及由TLR3啟動的信號通路中核轉(zhuǎn)錄因子κB(Nuclear f

3、actorκB，NF-κB)和干擾素調(diào)節(jié)因子7（interferon regulatory factor7，IRF-7）的影響研究比較欠缺。
　　本研究應用免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）技術對SPF雞人工感染IBV M41株后1、3、5、8、11、14、21和28天(dayspost infection，DPI)的氣管和腎臟中的IBV、TLR3、NF-κB和IRF-7及氣管和哈德氏腺中的SIgA進

4、行分析，同時對感染后不同時相氣管、腎臟和哈德氏腺的組織病理學變化進行觀察，旨在探討IBV M41毒株人工感染SPF雞后病毒在氣管、腎臟和哈德氏腺中的分布規(guī)律，及其對TLR3信號通路和黏膜SIgA的影響，揭示IBV M41感染雞的致病機理和宿主天然抗病毒的防御機制。研究結果如下:
　　1、IBV M41感染SPF雞后，氣管、腎臟和哈德氏腺出現(xiàn)不同程度的病理學變化。氣管在感染早期(1-8DPI)出現(xiàn)黏膜上皮細胞變性或壞死，黏膜下層淋巴

5、細胞浸潤，發(fā)生氣管炎癥，IHC檢測結果表明病毒含量在此期間維持較高水平，并在5DPI達到峰值;感染中期(11-14DPI)，氣管黏膜逐漸修復，上皮細胞再生，淋巴細胞浸潤減少，病毒含量快速降低;感染后期(21-28DPI)，氣管中的病毒被清除，組織基本結構恢復正常。腎臟組織在5DPI至11 DPI出現(xiàn)明顯的病理學變化，腎小管輕度變性或壞死，間質(zhì)有數(shù)個淋巴細胞浸潤，病毒含量在此期間較多，但較氣管組織少，在8DPI達到峰值;14DPI后病毒含

6、量降低并逐漸消失，組織病變逐漸減輕至結構正常。1DPI至3DPI哈德氏腺中無病毒分布也無明顯病理學變化;5DPI至14DPI，組織細胞變性或壞死，間質(zhì)增寬，淋巴細胞增多，并檢測到少量病毒分布;21DPI后，病毒消失，組織結構逐漸恢復。研究結果顯示氣管組織病變比腎臟和哈德氏腺嚴重，且病毒含量也明顯高于腎臟和哈德氏腺，表明IBV M41毒株對不同組織親嗜性不同，造成的病理損傷程度也不同，病理損傷程度和病毒含量存在相關性。
　　2、IH

7、C檢測結果顯示TLR3、NF-κB和IRF-7主要分布在氣管黏膜上皮細胞和腎臟腎小管上皮細胞胞漿中，部分胞核也有NF-κB和IRF-7分布。試驗組氣管中的TLR3、NF-κB和IRF-7的表達量在3DPI至8DPI出現(xiàn)不同程度上調(diào)，分別在5DPI、5DPI和8DPI達到峰值(P＜0.01)，IRF-7在細胞核中的表達量明顯增多;11DPI至14DPI，仍有較多的TLR3表達(P＜0.05)，NF-κB和IRF-7的表達量逐漸恢復到正常水

8、平;21DPI后，TLR3表達量也恢復到正常水平;試驗組腎臟中的TLR3和NF-κB的表達量在5DPI至11DPI出現(xiàn)不同程度上調(diào)，分別在8DPI和5DPI達到峰值(P＜0.01)，IRF-7的表達量在3DPI至5DPI略有上升，且細胞核中的表達量明顯增多;14DPI后，TLR3和NF-κB的表達量逐漸恢復到正常水平;IRF-7的表達量在8DPI恢復到正常水平，但細胞核中的表達量仍然較高，21DPI后減少。
　　3、在感染IBV

9、M41前期（1DPI至11DPI），試驗組和對照組哈德氏腺均無SIgA陽性細胞分布。14DPI，試驗組和對照組哈德氏腺均檢測到SIgA陽性細胞，試驗組SIgA陽性細胞較大較圓，充滿棕紅色陽性顆粒，且局部數(shù)量增多;對照組SIgA陽性細胞較小，呈三角形、橢圓形等。21DPI至28DPI，其形態(tài)和數(shù)量與對照組相近。而整個試驗過程中，氣管組織中均未檢測到SIgA陽性細胞分布。
　　綜上所述，IBV感染早期，SPF雞氣管出現(xiàn)明顯的病理學變化

10、，病毒含量從1DPI開始上升，在3DPI至8DPI維持較高水平，并在5DPI達到峰值;在此期間，氣管中TLR3、NF-κB和IRF-7的表達量均有不同程度上升，其中TLR3上升最明顯且持續(xù)時間最長，與對照組相比，從3DPI至14DPI，其陽性表達量差異顯著;NF-κB和IRF-7出現(xiàn)變化的時間分別在3DPI-8DPI和5DPI-8DPI，且兩者在細胞核中的表達量均增多，其中IRF-7最明顯。IBV感染后期，氣管組織結構恢復正常，病毒含量

11、迅速下降并逐漸消失，TLR3、NF-κB和IRF-7的表達量恢復到正常水平。IBV M41感染后腎臟組織出現(xiàn)輕度的病理學變化且出現(xiàn)病變的時間較遲，病變發(fā)生于5DPI-14DPI;其病毒含量和TLR3、NF-κB及IRF-7的表達量變化規(guī)律與氣管基本一致，但變化不如氣管明顯，且持續(xù)時間較氣管短，病毒含量較高時間點和TLR3、NF-κB及IRF-7表達量變化時間基本是在5DPI-8DPI左右。哈德氏腺中的SIgA陽性細胞在IBV M41感染