人工感染IBV與炎癥體活化相關(guān)因子表達(dá)的研究.pdf

1、炎癥體是一類(lèi)由多種蛋白組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體,主要包括NLRP1(NLR family,Pyrin Domain Containing1)、NLRP3、NLRP4和AIM2(Absent In Melanoma2)四種,其中NLRP3炎癥體與病毒感染的識(shí)別關(guān)系密切。研究表明NLRP3炎癥體通過(guò)激活白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素-18(Interleukin-18,IL-18)參與機(jī)體固有免疫的調(diào)節(jié),激活機(jī)體

2、對(duì)感染和損傷做出反應(yīng),在固有免疫中起著非常重要的作用。因此,研究炎癥體對(duì)機(jī)體固有免疫以及相關(guān)疾病的研究具有重要的意義。本研究通過(guò)人工感染IBV(Infectious Bronchitis Virus),用熒光定量 RT-PCR(Quantitative Reverse Transcription PCR,qRT-PCR)對(duì)炎癥體4個(gè)相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),并分析了炎癥發(fā)生過(guò)程中炎癥體相關(guān)因子表達(dá)的變化。
　　主要內(nèi)容如下:

3、　　首先,建立了與炎癥體4個(gè)相關(guān)的基因NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 qRT-PCR檢測(cè)方法,所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)高、擴(kuò)增效率為100％左右,且重復(fù)性好。
　　其次,體外培養(yǎng)雞胚氣管環(huán)感染傳染性支氣管炎病毒(IBV)野毒株GX-YL5和弱毒疫苗株H120,在感染后(DPI)的0d、1d、2d、3d、5d和7d分別收集氣管環(huán)提取RNA,對(duì)炎癥體4個(gè)相關(guān)基因的qRT-PCR檢測(cè)。結(jié)果表明,感染野毒株GX-Y

4、L5組與H120組、對(duì)照組相比,NLRP3基因的表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.05),caspase-1、IL-1β和IL-18基因的則無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　最后,利用IBV野毒株GX-YL5和弱毒疫苗株H120感染雛雞,在DPI0d、1d、3d、7d、14d和21d分別采集其氣管提取總蛋白和總RNA,同時(shí)進(jìn)行caspase-1酶活性分析以及用qRT-PCR檢測(cè)炎癥體4個(gè)相關(guān)基因和IBV載量。結(jié)果表明,氣管組織中IBV的載量在

5、感染后逐漸上升,至DPI7d達(dá)到峰值,然后逐漸下降;caspase-1酶的活性和NLRP3的表達(dá)在DPI1d-3d先上升,然后在DPI7d下降至最低值,然后又逐漸上升;IL-1β和IL-18的表達(dá)在DPI1-7d出現(xiàn)波動(dòng)起伏,但均在感染的中后期(IL-1β在DPI14d,IL-18在DPI21d)出現(xiàn)高峰。
　　本研究結(jié)果表明,IBV病毒感染初期激活了NLRP3炎癥體,從而導(dǎo)致了炎癥反應(yīng),能夠刺激caspase-1和IL-1β、I