REV感染對SPF雛雞免疫器官免疫功能及Cyclin D1表達(dá)的影響.pdf

1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病(RE)是禽類重要的免疫抑制性致瘤性疾病之一，但由于其臨診癥狀不典型，該病長期以來沒有得到足夠重視，現(xiàn)今我國養(yǎng)禽業(yè)對禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病(RE)的預(yù)防和防控已經(jīng)逐漸重視起來，該病由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus，REV)引起。細(xì)胞周期素D1(Cyclin D1)是一類與細(xì)胞周期功能狀態(tài)密切相關(guān)的蛋白質(zhì)家族，通過與特定蛋白激酶結(jié)合并激活其活性在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期G1期到S期中起關(guān)鍵作

2、用。本研究以1日齡SPF雛雞為研究對象，在成功制備出兔抗雞Cyclin D1多克隆抗體的基礎(chǔ)上，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其免疫器官中淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期分布及CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量及比值變化、應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)合MTT法檢測免疫器官中T、B淋巴細(xì)胞增殖功能變化、應(yīng)用RealTime PCR技術(shù)檢測免疫器官中Cyclin D1 mRNA表達(dá)的變化、應(yīng)用間接ELISA法檢測CyclinD1蛋白含量變化。通過上述各項(xiàng)被檢指標(biāo)的檢測，較全面系統(tǒng)的研

3、究了REV感染對SPF雛雞免疫器官的免疫功能及Cyclin D1表達(dá)的影響，為RE防治提供方向。研究結(jié)果如下:
　　(1)1日齡SPF雛雞感染REV后，其免疫器官胸腺和脾臟中，T淋巴細(xì)胞增殖功能于REV感染后第1-49 d均不同程度地低于對照雛雞，兩者于病毒感染后第14-28 d與對照雛雞比較均極顯著降低(P＜0.01);法氏囊未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。胸腺CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量在REV感染后14-28 d與對照雛雞相比顯著(P＜0.05)

4、或極顯著降低（P＜0.01）。CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量于REV感染后21-35 d極顯著低于對照雛雞(P＜0.01);在脾臟中CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量于病毒感染后7-35 d顯著(P＜0.05)或極顯著（P＜0.01）低于對照雛雞。CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量在REV感染后第3d、第14d及第28d與對照雛雞相比極顯著降低(P＜0.01);法氏囊CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量于病毒感染后3-14 d和第28 d與對照雛雞相比極顯著降低（P＜0.01）。C

5、D8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量于病毒感染后第1d極顯著低于對照雛雞（P＜0.01），第7d顯著高于對照雛雞(P＜0.05)，35-49 d極顯著高于對照雛雞（P＜0.01）。胸腺、脾臟、法氏囊CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值于病毒感染后與對照雛雞比較出現(xiàn)不同程度的降低（P＜0.01或P＜0.05）。表明REV感染1日齡SPF雛雞后，其主要免疫器官（胸腺、脾臟、法氏囊）細(xì)胞免疫功能呈現(xiàn)不同程度的抑制。
　　(2)1日齡SPF雛雞感染REV后，

6、法氏囊B淋巴細(xì)胞增殖功能于病毒感染后14-35 d極顯著低于對照雛雞（P＜0.01），其余未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。脾臟B淋巴細(xì)胞增殖功能在病毒感染后14-49 d顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)下降，其余未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。表明1日齡SPF雛雞感染REV后，其法氏囊等免疫器官的體液免疫功能也不同程度下降。
　　(3) REV感染1日齡SPF雛雞后14-28 d，其胸腺、脾臟、法氏囊淋巴細(xì)胞中G0/G

7、1期和S期細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的比例與對照雛雞比較不同程度增高，細(xì)胞主要集中在S期中進(jìn)行DNA復(fù)制，G2/M期細(xì)胞數(shù)比例少。表明REV感染1日齡雛雞后，其免疫器官中淋巴細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生變化，S期細(xì)胞比例增多，G2/M期的細(xì)胞數(shù)比例較少，細(xì)胞大量停滯于S期，表明細(xì)胞增殖受到抑制。
　　(4) REV感染1日齡SPF雛雞后，其胸腺中Cyclin D1 mRNA表達(dá)量不同程度高于對照雛雞。其中，Cyclin D1 mRNA表達(dá)量于REV感染

8、后14-28 d顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）高于對照雛雞;Cyclin D1蛋白含量在REV感染后第7d較對照雛雞極顯著降低(P＜0.01)，第14d較對照組雛雞顯著降低(P＜0.05)，在第35d顯著高于對照雛雞(P＜0.05)，但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。脾臟中Cyclin D1 mRNA表達(dá)量于REV感染后14-21 d極顯著(P＜0.01)高于對照雛雞，第28d顯著(P＜0.05)高于對照雛雞，其余未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.

9、05); CyclinD1蛋白含量在病毒感染后第1d和第49 d與對照雛雞相比顯著增高（P＜0.05），第7d及第21-35 d極顯著增高(P＜0.01)。法氏囊中Cyclin D1 mRNA表達(dá)量于病毒感染后第21-28 d顯著高于對照雛雞（P＜0.05）;Cyclin D1蛋白含量在病毒感染后第21d顯著增高(P＜0.05)，第14d、第28 d及第49 d極顯著增高(P＜0.01)。表明SPF雛雞免疫器官Cyclin D1 mRN