不同免疫方式對(duì)雛雞免疫器官發(fā)育、細(xì)胞增殖及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、為研究不同免疫方式對(duì)雛雞的應(yīng)激以及對(duì)雛雞免疫器官發(fā)育、細(xì)胞增殖、分化及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響,揭示免疫應(yīng)激對(duì)免疫器官發(fā)育抑制的機(jī)理,進(jìn)行如下試驗(yàn)。
　　 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　 選取1日齡健康固始雞公雛240只,隨機(jī)分為A、B、C、D四個(gè)處理,每個(gè)處理4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)15只雞。其中A組為對(duì)照組,抓捕后放回原籠；B組采用ND-IB弱毒苗進(jìn)行滴鼻點(diǎn)眼免疫；C組和D組均采用ND-IB弱毒苗和滅活苗進(jìn)行滴鼻點(diǎn)眼和皮下注射免疫,且D組從

2、7日齡起在日糧中添加維生素E(100 IU/kg)。所有雞只于10日齡早上8:00進(jìn)行免疫。
　　 試驗(yàn)一不同免疫方式對(duì)雛雞應(yīng)激敏感激素水平的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個(gè)處理每重復(fù)取3只雞,稱活體重,心臟采血,分離血清,ELISA試劑盒檢測(cè)血清應(yīng)激敏感激素促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)酮(CORT)的濃度,結(jié)果表明:滴鼻點(diǎn)眼和皮下注射免疫均對(duì)雛雞造成一定應(yīng)激；應(yīng)激從免疫后第3d開(kāi)始得到緩解；日糧

3、添加VE(100IU/kg)能夠有效緩解應(yīng)激。
　　 試驗(yàn)二不同免疫方式對(duì)雛雞體重與免疫器官發(fā)育的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個(gè)處理每重復(fù)取3只雞,稱活體重,分離胸腺、脾臟和法氏囊并稱重,計(jì)算免疫器官指數(shù)。結(jié)果表明:不同免疫方式對(duì)雛雞的體重均無(wú)顯著影響；皮下注射免疫導(dǎo)致雛雞胸腺重量顯著增加,添加VE(100IU/kg)后雛雞的胸腺重略有降低；不同免疫方式對(duì)雛雞脾臟和法氏囊發(fā)育均無(wú)顯著影響。
　　

4、 試驗(yàn)三不同免疫方式對(duì)雛雞免疫器官細(xì)胞增殖的影響
　　 丁免疫后的1d、3d、5d和7d從每個(gè)處理每重復(fù)取1只雞,分離胸腺、脾臟和法氏囊,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)免疫器官細(xì)胞周期百分比,包括:分裂間期1(G1期)、DNA合成期(S期)和有絲分裂期(M期),計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)。結(jié)果表明:皮下注射免疫導(dǎo)致雛雞胸腺G1細(xì)胞比例在免疫后第3-5d時(shí)升高,抑制了胸腺細(xì)胞的增殖；添加VE(100IU/kg)后胸腺G1細(xì)胞比例降低,更多細(xì)胞進(jìn)入DN

5、A合成期:各組的脾臟細(xì)胞增殖指數(shù)在免疫后1-5d呈下降趨勢(shì)。
　　 試驗(yàn)四不同免疫方式對(duì)免疫器官細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)量的影響
　　 于免疫后的1d、3d、5d和7d從每個(gè)處理每重復(fù)取1只雞,分離胸腺、脾臟和法氏囊,提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄出cDNA,用SYBR Green1做染料,以β-actin為參照基因,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)抗凋亡基因Bcl-2、促凋亡基因Fas和FasL的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果表明:皮下注射免疫導(dǎo)致法