FSH對(duì)支持細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、睪丸支持細(xì)胞位于曲精細(xì)管中，是精子發(fā)生的微環(huán)境的主要構(gòu)成。許多激素和影響因子都參與了睪丸支持細(xì)胞增殖調(diào)控，其中FSH是調(diào)節(jié)睪丸支持細(xì)胞增殖進(jìn)程的重要激素之一。因此，研究FSH對(duì)犢牛睪丸支持細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)機(jī)制不僅能為人工調(diào)控支持細(xì)胞增殖奠定一定基礎(chǔ)，而且對(duì)提高雄性動(dòng)物的生殖能力也具有十分重要的意義。
　　本實(shí)驗(yàn)以新生犢牛睪丸為實(shí)驗(yàn)材料，利用胰酶、膠原酶兩步消化法對(duì)支持細(xì)胞進(jìn)行分離，差速貼壁法純化支持細(xì)胞，進(jìn)行孚爾根染色法、HE染色法

2、以及油紅O染色法鑒定支持細(xì)胞;以培養(yǎng)的犢牛支持細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，用不同濃度的FSH(0、0.01、0.02、0.04、0.08IU/ml)對(duì)支持細(xì)胞進(jìn)行處理，利用CCK8檢測(cè)五組濃度6個(gè)時(shí)間點(diǎn)支持細(xì)胞增殖情況并用Realtime-PCR檢測(cè)一定濃度FSH處理后CDC25等基因表達(dá)情況。
　　兩步酶法可以對(duì)犢牛睪丸支持細(xì)胞進(jìn)行分離純化，經(jīng)孚爾根染色等方法鑒定純度大于95％;體外培養(yǎng)條件下的支持細(xì)胞能夠傳至第20代，并且隨著傳代次數(shù)的增

3、加，支持細(xì)胞的增殖速度越來越慢。
　　FSH可以顯著提高睪丸支持細(xì)胞體外增殖的效率，0.04IU/ml的FSH能顯著地促進(jìn)支持細(xì)胞體外增殖。
　　FSH顯著促進(jìn)WNT/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)量的提高，可以通過該信號(hào)通路促進(jìn)支持細(xì)胞的增殖。
　　FSH對(duì)CDC25A基因表達(dá)影響不顯著，在一定濃度范圍內(nèi)，F(xiàn)SH顯著促進(jìn)CDC25B的表達(dá)。CDC25B可能參與促進(jìn)支持細(xì)胞增殖作用，其可能決定支持細(xì)胞的增殖速度