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文檔簡介
1、目的:探討胞質(zhì)M-CSF誘導人乳腺癌MCF-7細胞對5-FU和ADR耐藥的分子機制。
方法:熒光定量PCR檢測DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b mRNA,MDR-1 mRNA的表達;epiquik DNA methyltransferase3B Activity/Inhibitor Screening Assay Core Kit試劑盒分析 DNMT3b活性的變化;MSP實驗分析MDR-1基因啟動子甲基化水平的改變;Western
2、 Blotting檢測DNMT3b以及P-gp的表達;MTT分析MCF-7細胞增殖活性。
結(jié)果:熒光定量PCR實驗結(jié)果顯示:MCF-7-M細胞DNMT3b mRNA的表達水平顯著低于 MCF-7細胞和 MCF-7-C細胞(p<0.05),MCF-7-M細胞中 MDR-1 mRNA的表達水平明顯高于MCF-7細胞和MCF-7-C細胞(p<0.05),MCF-7細胞和MCF-7-C細胞中DNMT3b mRNA和MDR-1 mRNA
3、的表達水平則無明顯差異(p>0.05)?;钚苑治鰧嶒灲Y(jié)果顯示:MCF-7-M細胞中DNMT3b的活性顯著低于MCF-7細胞和 MCF-7-C細胞(p<0.05)。MSP實驗結(jié)果顯示:MCF-7-M細胞MDR-1基因啟動子甲基化水平低于 MCF-7細胞和 MCF-7-C細胞(p<0.05)。Western Blotting實驗結(jié)果顯示:MCF-7-M細胞中DNMT3b蛋白的表達低于MCF-7細胞和 MCF-7-C細胞(p<0.05),MC
4、F-7-M細胞 P-gp的表達則顯著高于MCF-7細胞和MCF-7-C細胞(p<0.05)。MTT實驗結(jié)果顯示:在不同藥物不同濃度的抗腫瘤藥物作用下,MCF-7-M存活率均明顯高于 MCF-7細胞和 MCF-7-C細胞(p<0.05),MCF-7-C細胞的存活率相對 MCF-7細胞則無明顯差異(p>0.05),MCF-7細胞、MCF-7-C細胞 MCF-7-M細胞對5-FU的IC50值分別為641.741±119.337、668.295
5、±78.188和3359.326±343.345μmol/L;對 ADR的IC50值分別為3.073±0.059、2.853±0.086和7.234±0.047μmol/L(p<0.05)。
結(jié)論:胞質(zhì)M-CSF可下調(diào)MCF-7細胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b表達和降低其活性、下調(diào)MDR-1基因的甲基化水平,上調(diào)P-gp的表達。胞質(zhì)M-CSF通過降低DNMT3b活性和MDR-1基因的甲基化水平,上調(diào)P-gp的表達,誘導MCF-
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