胞質(zhì)M-CSF對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞糖代謝的影響及其機(jī)制.pdf

1、目的:探討巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞糖代謝的影響及其機(jī)制。
　　方法:胞質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染M-CSF的MCF-7細(xì)胞（MCF-7-M）系由實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建。常規(guī)培養(yǎng)MCF-7-M細(xì)胞、親本MCF-7細(xì)胞。ATP檢測試劑盒分析MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的ATP生成。葡萄糖測定試劑盒、乳酸測試盒測定MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的葡萄糖消耗和乳酸分泌情況。蛋白印跡法分析在PI3K抑制劑和AKT抑制劑預(yù)處理

2、前后，M-CSF對MCF-7細(xì)胞的糖酵解關(guān)鍵酶HK2和PKM2，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體GLUT-1表達(dá)的影響。MTT法觀察在ATP消耗劑預(yù)處理前后，MCF-7和MCF-7-M細(xì)胞對5-FU敏感性的變化情況。
　　結(jié)果:ATP檢測分析顯示：MCF-7-M細(xì)胞的ATP水平顯著高于MCF-7細(xì)胞（p<0.05），糖酵解抑制劑2-DG降低MCF-7細(xì)胞（p<0.05）和MCF-7-M細(xì)胞的（p<0.01）ATP水平，與MCF-7細(xì)胞比較，2-DG降

3、低MCF-7-M細(xì)胞ATP的效應(yīng)更明顯。氧化磷酸化抑制劑OLIG和溶媒分別對MCF-7細(xì)胞和MCF-7-M細(xì)胞的ATP水平影響均不明顯（p>0.05）。葡萄糖攝取和乳酸分泌實(shí)驗(yàn)顯示：MCF-7-M細(xì)胞的糖攝取能力顯著高于MCF-7細(xì)胞(p<0.01），MCF-7-M細(xì)胞乳酸分泌含量分別顯著高于對應(yīng)的MCF-7細(xì)胞（p<0.01）；經(jīng)API-2處理后，MCF-7細(xì)胞（p<0.05）和MCF-7-M細(xì)胞（p<0.01）葡萄糖消耗均降低，乳酸

4、分泌量均顯著減少（p<0.01）。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)顯示：MCF-7-M細(xì)胞GLUT-1（p<0.05）、HK2（p<0.05）和PAM2（p<0.01）的表達(dá)顯著高于MCF-7細(xì)胞；LY294002或API-2均可抑制MCF-7-M細(xì)胞GLUT-1的表達(dá)（p<0.05）。MTT實(shí)驗(yàn)顯示：用3-BrPA預(yù)處理，MCF-7-M細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞對5-FU的藥物敏感性顯著增強(qiáng)(p<0.01)。
　　結(jié)論:胞質(zhì)M-CSF通過誘導(dǎo)GLUT-1