抑制Dicer基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞MCF-7周期和藥物敏感性的影響.pdf

1、Dicer是microRNA(miRNA)合成過程中的重要酶類，參與miRNA的剪切和成熟。目前研究已經(jīng)證實(shí)了多種miRNA參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程，一些腫瘤中亦可見Dicer的異常表達(dá)，但Dicer在其中所起的作用不清。本研究擬通過RNA技術(shù)干擾Dicer基因的表達(dá)，觀察乳腺癌細(xì)胞系MCF—7生物學(xué)特性及細(xì)胞對(duì)順鉑Platinum藥物敏感性的改變，探討Dicer對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和藥物敏感性的影響，為提高乳腺癌治療效果提供理論指導(dǎo)。合成

2、帶有熒光標(biāo)記、特異性干擾Dicer基因的siRNA序列，應(yīng)用脂質(zhì)體lipofectamine2000轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞MCF—7，半定量RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)的轉(zhuǎn)染效率并用Western blot方法驗(yàn)證。在干擾效率最高的時(shí)間點(diǎn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染后MCF—7細(xì)胞周期的變化，XTT法評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞對(duì)不同濃度化療藥物順鉑(Platinum)生長(zhǎng)抑制率的變化。RT-PCR檢測(cè)MCF—7內(nèi)miR—21表達(dá)量的變化，Western blot檢

3、測(cè)和細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白p21、p27、CDK2、CDK4表達(dá)量的變化。通過實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，siRNA序列能特異性的抑制MCF—7細(xì)胞Dicer的表達(dá)，轉(zhuǎn)染后48小時(shí)抑制效果最明顯，此時(shí)細(xì)胞出現(xiàn)明顯的G1期阻滯，轉(zhuǎn)染后MCF—7細(xì)胞在順鉑濃度為2.5μM、5.0μM、10μM的劑量下藥物敏感性提高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)siRNA轉(zhuǎn)染組p21，p27的蛋白表達(dá)升高，在乳腺癌中發(fā)揮癌在基因作用的miR—21明顯減少。由此我們得出結(jié)論，干擾Dicer基