NO在人乳腺癌細(xì)胞中的過量產(chǎn)生及其對ADM、5-Fu敏感性的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的: 通過體外實(shí)驗(yàn)研究，在細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的作用下，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7產(chǎn)生的一氧化氮(NO)對于調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性的影響，進(jìn)一步闡明內(nèi)源性NO對于減低腫瘤細(xì)胞耐藥性的可能性，探討其可能機(jī)制及用于輔助乳腺癌化學(xué)治療的可行性。 方法: 選取人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7單層培養(yǎng)，應(yīng)用IL-1β處理培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞，采用一氧化氮測試盒檢測不同濃度(10-13M、10-12M、10-

2、11M、10-10M、10-9M、10-8M)IL-1β、在不同時間(2h、4h、8h、16h、24h)處理MCF-7細(xì)胞后NO的產(chǎn)生情況，從而選擇適當(dāng)?shù)乃幬餄舛群妥饔脮r間。應(yīng)用Western Blot檢測IL-1β處理后MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表達(dá)。根據(jù)上述結(jié)果，設(shè)置實(shí)驗(yàn)組和對照組，選用經(jīng)典的乳腺癌治療藥物阿霉素(ADM)和氟尿嘧啶(5-Fu)，分別處理實(shí)驗(yàn)組和對照組，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測MCF

3、-7細(xì)胞對兩種化療藥物的敏感性；選用一氧化氮合酶(NOS)藥理學(xué)抑制劑NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和NO合成原料L-精氨酸(L-Arg)作為處理因素，采用MTT法檢測在以上兩種處理因素作用下MCF-7細(xì)胞對化療藥物敏感性。 結(jié)果: 在IL-1β與MCF-7細(xì)胞孵育的4h NO開始顯著增多(95.216μM)，并在8h達(dá)峰(148.661μM)，隨后逐漸下降，而未加入IL-1β的對照組，在整個培養(yǎng)過程中NO產(chǎn)量沒

4、有明顯變化。IL-1β作為一種細(xì)胞因子，誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)源性NO，NO產(chǎn)生量與IL-1β劑量間存在著劑量依賴關(guān)系。Western Blot分析的結(jié)果顯示：無IL-1β誘導(dǎo)作用時，MCF-7細(xì)胞基本不表達(dá)iNOS蛋白，在IL-1β誘導(dǎo)作用下，細(xì)胞大量表達(dá)iNOS蛋白。同時無論L-Arg、L-NMMA存在與否，IL-1β誘導(dǎo)作用產(chǎn)生的iNOS蛋白都沒有差異。采用MTT法分別檢測1nM IL-1β作用8h后實(shí)驗(yàn)組和對照組MCF-7細(xì)胞

5、的生存率，可見當(dāng)ADM濃度為0.5μM和1μM時，經(jīng)IL-1β處理后的MCF-7細(xì)胞的生存率有較明顯的下降，當(dāng)ADM濃度逐漸升高后，兩組的生存率差異不顯著。同樣，IL-1β在一定程度上有提高人乳腺癌細(xì)胞MCF-7對5-Fu敏感性的作用。iNOS的抑制劑L-NMMA的加入顯著提高了實(shí)驗(yàn)組MCF-7細(xì)胞的生存率；L-Arg作為NO合成促進(jìn)劑的加入，在一定程度上提高了化療藥的敏感性；當(dāng)L-Arg、L-NMMA與IL-1β同時存在，腫瘤細(xì)胞的生

6、存率不會有明顯下降。 結(jié)論: 人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7在一定劑量IL-1β及一定時間的作用下，通過誘導(dǎo)iNOS,能合成大量內(nèi)源性的NO。內(nèi)源性NO合成的增加能提高M(jìn)CF-7細(xì)胞對ADM、5-Fu的化學(xué)敏感性。通過導(dǎo)入NOS抑制劑L-NMMA和NO合成促進(jìn)劑L-Arg兩個處理因素，進(jìn)一步顯示了是NO調(diào)節(jié)了腫瘤細(xì)胞的敏感性。IL-1β誘導(dǎo)iNOS合成NO增加，但在L-NMMA和L-Arg的作用下，iNOS的量不發(fā)生改變。本研