Mus81在乳腺癌中的表達(dá)及其與藥物敏感性的關(guān)系.pdf

1、目的:通過(guò)檢測(cè)Mus81在乳腺癌病灶組織和乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)，及觀察siRNA抑制Mus81基因表達(dá)后，5-氟尿嘧啶作用下乳腺癌細(xì)胞MCF-7的細(xì)胞活性、克隆形成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期的變化，探究Mus81表達(dá)在乳腺腫瘤發(fā)生、發(fā)展及化療敏感性中的作用。
　　方法:采用PCR和Western Blot檢測(cè)乳腺癌病灶組織、癌旁組織、乳腺良性病變組織及乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、SK-BR-3中Mus81的表達(dá);采用脂質(zhì)體將針對(duì)Mus81的

2、3對(duì)siRNA序列分別(siMus81-1、siMus81-2、siMus81-3)轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，用Real-Time PCR和Western Blot檢測(cè)Mus81mRNA和蛋白的表達(dá)，篩選出沉默效率最高的序列。使用CCK-8檢測(cè)不同濃度5-氟尿嘧啶對(duì)MCF-7細(xì)胞的毒性作用。將沉默效率最高的序列轉(zhuǎn)入MCF-7細(xì)胞，特定濃度5-氟尿嘧啶作用后，采用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的活性、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增

3、殖能力、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。
　　結(jié)果:
　　1.乳腺癌病灶組織Mus81平均表達(dá)水平明顯低于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;乳腺癌病灶組織Mus81平均表達(dá)水平明顯低于良性病變組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);癌旁組織Mus81平均表達(dá)水平略低于乳腺良性病變組織，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.處于TNM分期0、Ⅰ期的乳腺癌病灶組織Mus81表達(dá)水平高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，差

4、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); Mus81表達(dá)水平與患者年齡、腫瘤大小、組織類型、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR無(wú)關(guān)（P＞0.05）。
　　3.乳腺癌MCF-7細(xì)胞Mus81表達(dá)水平高于SK-BR-3細(xì)胞，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.Mus81表達(dá)水平影響5-氟尿嘧啶處理的MCF-7細(xì)胞活性及克隆形成。5-氟尿嘧啶處理細(xì)胞，siMus81轉(zhuǎn)染組細(xì)胞活性低于陰性轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05); s

5、iMus81轉(zhuǎn)染組細(xì)胞克隆形成率低于陰性轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.Mus81表達(dá)水平影響5-氟尿嘧啶處理的MCF-7細(xì)胞周期。陰性轉(zhuǎn)染組和siMus81轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞周期分布未見(jiàn)明顯差異。5-FU作用后，siMus81轉(zhuǎn)染組的G2期多于陰性轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);siMus81轉(zhuǎn)染組的S期少于陰性轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　6.Mus81表達(dá)水平影響5-氟尿

6、嘧啶處理的MCF-7細(xì)胞凋亡。陰性轉(zhuǎn)染組和siMus81轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞凋亡率未見(jiàn)明顯差異(P＜0.05)。5-FU作用后，siMus81轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞凋亡率多于陰性轉(zhuǎn)染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　7.Mus81表達(dá)水平影響5-氟尿嘧啶處理的MCF-7細(xì)胞p53蛋白表達(dá)。采用5-氟尿嘧啶處理MCF-7細(xì)胞后，siMus81轉(zhuǎn)染組較陰性轉(zhuǎn)染組p53蛋白表達(dá)水平增加。
　　結(jié)論:Mus81在乳腺癌病灶組織中表達(dá)下調(diào)、