microRNA-200c在結直腸癌細胞中對5-FU化學敏感性的影響及其機制的研究.pdf

1、結直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是最常見的消化道惡性腫瘤之一。在世界范圍內其發(fā)病率位居惡性腫瘤發(fā)病率的第三位，死亡率位居癌癥相關死亡率的第五位，成為危害人民健康的主要因素。腫瘤在化療治療中，耐藥現(xiàn)象已成為影響腫瘤患者生存率和復發(fā)的嚴重問題。提高腫瘤對于化療藥物的敏感性成為結直腸癌研究的熱點。
　　microRNA-200c(miR-200c)屬于miR-200家族。研究報道，miR-200c在結直腸癌組織與正

2、常的癌旁組織相比存在異常表達，并且與結直腸癌的生長、增殖、侵襲、轉移密切相關，甚至于在結直腸癌的耐藥中也發(fā)揮著重要作用。
　　基于5-氟尿嘧啶(5-fluoronracil，5-FU)化療，半個世紀以來，一直是晚期CRC患者的主要治療手段?；颊邔?-FU的反應率仍然不高，主要是因為耐藥的產生。因此，我們擬闡明miR-200c對CRC化療敏感性的影響。
　　目的:探討結直腸癌細胞株中，miR-200c表達水平對5-FU化學敏感

3、性的影響及其可能的作用機制。
　　方法:
　　1實時熒光定量PCR檢測SW620、SW480、HCT116、HT29、HCT8細胞中內源性miR-200c的表達水平;
　　2 Target Scan和miRBase數(shù)據(jù)庫查找miR-200c可能的與耐藥相關的下游靶基因;
　　3分別將miR-200c類似物或抑制物及其相應的陰性對照物轉染結腸癌SW620細胞、HCT116細胞。轉染24h后，再分別加入1000μg/

4、mL與568μg/mL的5-FU作用24 h，MTS及流式細胞術分別檢測并計算轉染后5-FU的半數(shù)抑制濃度(half inhibition concentration，IC50)的變化及細胞凋亡的改變;結腸癌SW620細胞轉染miR-200c類似物、抑制物及其相應的陰性對照物48h后，再加入1000μg/mL的5-FU作用8h，Western blotting檢測轉染后細胞中PTEN(phosphataseand tensin homo

5、logy deleted on chromosome ten)、p-Akt(phosoho-Akt，磷酸化Akt)、Akt表達的變化。
　　結果:
　　1 miR-200c在5株細胞株中表達水平不同，在SW620、HCT116細胞中的表達水平相對居于中位;
　　2 PTEN、PPP2CA（protein phosphatase2A，蛋白質磷酸酶2A）、PPP2R1B（protein phosphatase2 regul

6、atory subunit A beta，蛋白質磷酸酶2調節(jié)亞基1B）、SOCS6(suppressor ofcytokine signaling6，細胞因子信號抑制因子6)、A20(TNFAIP3)（tumor necrosis factor alpha-induced protein3，腫瘤壞死因子α誘導蛋白3）為miR-200c可能直接調控的靶基因并且與耐藥密切相關;
　　3 miR-200c類似物組對5-FU的IC50顯著

7、高于相應陰性對照組(P均＜0.05);相反，miR-200c抑制物組對5-FU的IC50顯著低于相應的陰性對照組(P＜0.05)。
　　4 miR-200c類似物組與相應的陰性對照組相比，降低了5-FU促細胞凋亡的作用（P均＜0.05）;相反，miR-200c抑制物組與相應的陰性對照組相比，提高了5-FU促細胞凋亡作用(P＜0.05)。
　　5 miR-200c類似物組PTEN蛋白表達水平顯著低于相應的陰性對照組，而p-Ak