5-FU對結直腸癌腫瘤干細胞131I-AC133mAb顯像效果影響的實驗研究.pdf

1、目的：
　　5-FU化療干預結腸癌LoVo細胞系及其荷瘤動物模型，研究化療干預對其中腫瘤干細胞的比例的影響。在5-FU干預下，通過131I-AC133mAb顯像結腸癌腫瘤干細胞，測量腫瘤組織和對側肌肉（T/M）的比值，評價化療藥對顯像效果的影響
　　方法：
　　1.Iodogen標記法，按抗體重量（mg）/131I-NaI放射性活度（mCi）=1：20，制備探針131I-AC133mAb，用PD10的柱子純化標記后的標

2、記物，薄層紙層析法測定標記物1-7天放化純。
　　2.細胞水平：MTT試驗繪制5-FU對LoVo細胞的增殖抑制曲線，找到合適5-FU濃度。體外細胞5-FU干預，流式細胞檢測CD133+腫瘤干細胞的比例變化。
　　3.腫瘤組織：制備結腸癌LoVo細胞荷瘤裸鼠模型，腫瘤直徑約0.8cm時分兩組，一組瘤內多點注射0.2ml的2.5μg/ml5-FU，一組瘤內注射0.2ml的生理鹽水，共兩次，每次間隔兩天，觀察裸鼠的成瘤能力及腫瘤生

3、長情況。腫瘤直徑約1cm時顯像，裸鼠尾靜脈注射131I-AC133mAb，1-7天行多時點顯像，采用感興趣區(qū)法（ROI）獲得各時點腫瘤與本底（T/B）的放射性計數(shù)比值。顯像結束處死兩組裸鼠，測量各臟器組織的注射百分劑量率（％ID/g），分析131I-AC133mAb的生物學分布。兩組腫瘤組織制備細胞懸液流式細胞檢測分析腫瘤干細胞的比例。兩組腫瘤組織HE染色，觀察腫瘤壞死情況。
　　4.采用IBM SPSS Statistics19

4、.0軟件進行統(tǒng)計分析計量資料，均以95％的置信區(qū)間表示。樣本均數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.131I-AC133mAb標記率為75.04％±0.86％（n=4），純化后，放化純96.34％±2.23％（n=4），室溫放置7天放化純逐漸降低，第7天70.13％±1.45％（n=4）。
　　2.細胞水平：MTT試驗中5-FU濃度在0.25μg/ml~25μg/ml時，隨著藥物

5、濃度的增加，細胞存活率下降；5-FU<0.25μg/ml時，細胞存活率穩(wěn)定88％左右；當5-FU濃度為2.5μg/ml時，腫瘤細胞存活率為50％~60％。2.5μg/ml5-FU處理體外細胞培養(yǎng)，細胞流式檢測5-FU組和生理鹽水組中CD133+腫瘤干細胞比例分別為41.8％±1.27％（n=4）和36.75％±2.72％（n=4），（t=4.953，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義。
　　3.腫瘤組織水平結果：
　　1)荷瘤裸

6、鼠經(jīng)5-FU兩次化療后，5-FU組和生理鹽水組裸鼠體重分別為14.8g±1.15g（n=5）和16.5g±1.80g（n=5），（t=3.984，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義；腫瘤體積分別為0.181cm3±0.127cm3（n=5）和0.234cm3±0.162cm3（n=5）,（t=1.735，P>0.05）差異無統(tǒng)計學意義。
　　2)荷瘤裸鼠131I-AC133mAb顯像，瘤體第3天出現(xiàn)顯像劑明顯濃聚并逐漸清晰。第7天的5

7、-FU組和生理鹽水組T/B分別為3.131±1.040（n=5）和2.981±0.928（n=5），（t=3.872，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義。
　　3)生物分布結果顯示兩組腫瘤、血液及肝臟組織均有較高的％ID/g值。5-FU組和生理鹽水組中腫瘤％ID/g值分別為1.091±0.24（n=4）和0.859±0.40（n=4），（t=2.521，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義；血液％ID/g值分別為4.070±0.62（n=4

8、）和3.317±0.80（n=4），（t=3.637，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義；肝臟％ID/g值分別為1.018±0.46（n=4）和1.662±2.08（n=4），（t=2.578，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義。
　　4)流式分析，5-FU組和生理鹽水組中CD133+腫瘤干細胞比例分別為18.5％±2.27％（n=4）和11.0％±1.63％（n=4），（t=4.423，P<0.05）差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：