靶向活化Ⅱ型大麻素受體抑制RA炎癥性骨侵蝕的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察Ⅱ型大麻素受體（cannabinoid receptor2，CB2）在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）疾病進(jìn)程中的表達(dá)變化，分析CB2選擇性激動(dòng)劑JWH-133對(duì)RA炎癥性骨侵蝕的治療作用。
　　方法：雄性 DBA/1小鼠50只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為5組，即正常對(duì)照組（Control）、模型組（Vehicle）、JWH-133低劑量治療組（L-JWH-133）、JWH-133高劑量治療組（

2、H-JWH-133）和陽(yáng)性對(duì)照組（甲氨蝶呤治療組，MTX），每組10只。采用牛Ⅱ膠原誘導(dǎo)的小鼠CIA模型，藥物治療組于初次免疫后第28天（D28）經(jīng)腹腔分別給予JWH133（1mg/kg/d和10mg/kg/d）和MTX（20mg/kg，每周2次），連續(xù)給藥6周。模型組經(jīng)腹腔注射生理鹽水0.1ml/kg/d，空白組小鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不予處理。分別觀察各組小鼠的體重、后足足掌厚度變化，并對(duì)關(guān)節(jié)炎的腫脹程度進(jìn)行評(píng)分。Micro-CT檢查評(píng)估骨組

3、織破壞程度，H&E染色評(píng)估滑膜增生和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度，番紅O染色檢測(cè)軟骨破壞程度，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色檢測(cè)成熟破骨細(xì)胞，免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)CB2、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-1β、白介素-6（IL-6）、基質(zhì)金屬蛋白酶-3（matrix metallo proteinases-3, MMP-3）、環(huán)氧化酶-2（Cyclooxyge

4、nase-2,COX-2）、誘導(dǎo)性一氧化氮合酶（hadueed-nitric oxide syathase,iNOS）以及核因子-κB受體活化因子配體（receptor activators of nuclear factor-kappa B ligand，RANKL）和骨保護(hù)素（osteoprotegerin,OPG）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：DBA/1小鼠初次免疫21天（D21）開始，體重逐漸下降，最低為（D35，17.99±1

5、.44）g，明顯低于Control組（D35，21.81±1.23）g比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）給予JWH-133后，小鼠體重逐漸增加，與Vehicle組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CIA模型小鼠后足于D21開始出現(xiàn)腫脹，靶向激活CB2后小鼠足掌厚度開始減少，H-JWH-133組D42足掌厚度為（2.52±0.12）mm與Vehicle組（2.63±0.07）mm比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；D42時(shí)H-

6、JWH-133組關(guān)節(jié)炎評(píng)分（13.6±1.14）與Vehicle組（15.6±0.55）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Micro-CT掃描結(jié)果顯示Vehicle組骨質(zhì)破壞嚴(yán)重，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)消失，經(jīng)選擇性CB2受體激動(dòng)劑治療后骨質(zhì)破壞逐漸減輕，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)得到恢復(fù)；Control組骨體積（BV）、骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨面積分?jǐn)?shù)（BS/BV）、骨小梁厚度（Tb.Th）分別為（5.90±0.12）mm3、（32.52±0.89）％、（

7、9.26±0.62） mm、（0.36±0.02）mm；Vehicle組為（3.77±0.22）mm3、（17.81±0.95）%、（17.78±1.03） mm、（0.21±0.01）mm，H-JWH-133組為（3.91±0.23）mm3、（19.45±0.98）%、（16.82±0.56） mm、（0.24±0.01）mm；H-JWH-133組為（5.22±0.19）mm3、（24.94±1.12）%、（11.81±0.60） m

8、m、（0.30±0.02）mm，與Vehicle組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。H&E染色顯示Vehicle組滑膜組織滑膜組織顯著增生，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，靶向活化CB2后滑膜組織炎癥明顯減輕。番紅O染色顯示Vehicle組軟骨細(xì)胞大量壞死，局部軟骨層完全消失，H-JWH-133組軟骨細(xì)胞顯著增多，軟骨層結(jié)構(gòu)明顯恢復(fù)。TRAP染色結(jié)果顯示，CIA模型組關(guān)節(jié)有大片紫紅色區(qū)域，H-JWH-133治療后破骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少。免疫組織化學(xué)

9、染色結(jié)果顯示CB2在CIA小鼠的滑膜組織和骨組織均有表達(dá)；Vehicle組TNF-?、IL-1?、IL-6、MMP-3、COX-2和iNOS的表達(dá)明顯增高，選擇性CB2受體激動(dòng)劑治療后上述因子表達(dá)顯著降低；H-JWH-133組RANKL表達(dá)強(qiáng)度較Vehicle組顯著降低，OPG表達(dá)則高于Vehicle組。
　　結(jié)論：CB2選擇性激動(dòng)劑JWH-133能抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減少炎性因子分泌；JWH-133能下調(diào)RANKL表達(dá)，促進(jìn)OPG