外周大麻素1型受體抑制劑的篩選及減肥作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　采用高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠肥胖模型觀察新合成的大麻素1型受體（cannabinoid1receptor，CB1R）抑制劑的減肥作用及對抑郁行為的影響，篩選出減肥效果好，中樞副作用低的外周CB1受體抑制劑。另一方面，研究其調(diào)節(jié)脂代謝的機(jī)制，為新型外周CB1受體抑制劑應(yīng)用于肥胖的治療提供新的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗依據(jù)。
　　方法：
　　在體實(shí)驗：選用高脂飲食誘導(dǎo)成功的肥胖小鼠，給予新化合物，并記錄給藥組和對照組每天小鼠體重

2、變化情況，在給藥18天后，采用高架十字迷宮實(shí)驗（EPM）、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗（FST）、懸尾實(shí)驗（TST）進(jìn)行抑郁行為學(xué)的檢測。測定小鼠空腹血糖和胰島素抵抗（ITT）及葡萄糖耐受實(shí)驗(GTT)。測定血清中甘油三脂、總膽固醇、HDL、LDL及LDH、ALT、AST等生化指標(biāo)。稱量小鼠生殖器周圍脂肪組織及肝臟。采用HE染色，觀察各組小鼠脂肪細(xì)胞及肝細(xì)胞的形態(tài)。
　　離體實(shí)驗：
　　采用PA-Na(0.5 mM)處理HepG-2細(xì)胞24

3、h造成脂肪肝的細(xì)胞模型，再加入不同濃度（3、10、30μM）的ZH-101-S處理細(xì)胞24小時。采用MTT法檢測細(xì)胞的活性，試劑盒檢測甘油三脂(TG)、總膽固醇(CHOL)代謝指標(biāo)水平。線粒體數(shù)量采用MitoTrackerRed染色法檢測，熒光素酶法檢測細(xì)胞中ATP含量，H2DCF-DA熒光探針法檢測細(xì)胞中ROS的含量，Western blotting法檢測線粒體膜上CB1受體的表達(dá)及p-AMPK、PGC-1α表達(dá)水平。
　　結(jié)果

4、：
　　在體實(shí)驗：持續(xù)給予CB1受體抑制劑ZH-101-S30mg/kg的小鼠體重較高脂對照組下降趨勢明顯。EPM、FST、TST等行為學(xué)模型結(jié)果顯示，與利莫那班組相比，外周CB1受體抑制劑ZH-101-S可增加小鼠在EPM中進(jìn)入開放臂的頻率、時間和運(yùn)動距離，降低了小鼠在FST、TST中的不動時間。ZH-101-S與利莫那班一樣，具有改善高脂小鼠胰島素抵抗及葡萄糖耐受的情況。并可降低小鼠血清CHOL、TG、Glu、LDL、AST、

5、ALT、LDH水平，升高HDL-C，減小脂肪細(xì)胞的直徑，改善肝臟組織的形態(tài)，改善脂質(zhì)代謝及肝損傷。
　　離體實(shí)驗：
　　MTT結(jié)果表明0.5 mM PA-Na及3、10、30μM ZH-101-S對HepG-2細(xì)胞基本無損傷。油紅染色結(jié)果顯示，與PA-Na處理組相比，30μM ZH-101-S處理使細(xì)胞內(nèi)脂滴的含量顯著減少了30.0％。與PA-Na處理組相比，30μM ZH-101-S處理使細(xì)胞內(nèi)CHOL降低了30.0%，T

6、G水平降低了63.6%，且TG水平呈濃度依賴性降低。Western blot結(jié)果顯示，肝細(xì)胞線粒體膜上存在CB1受體的表達(dá)，并且ZH-101-S可促進(jìn)P-AMPK、PGC-1α的表達(dá)。與PA-Na處理組相比，ZH-101-S處理可使線粒體數(shù)目增加、ATP合成增加及ROS含量減少，線粒體功能改善。
　　結(jié)論：
　　ZH-101-S給藥可顯著減輕肥胖小鼠體重，改善脂代謝，在保持利莫那班減肥效應(yīng)的同時避免了其致抑郁樣的副作用。其減