Mcl-1靶向抑制劑的動態(tài)連接篩選研究.pdf

1、Bcl-2家族蛋白是實現(xiàn)精準、高效殺傷腫瘤細胞的重要藥物靶點。在這個家族中，抗凋亡和促凋亡成員通過構(gòu)成復雜動態(tài)的蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡來調(diào)節(jié)細胞凋亡?？沟蛲龅鞍譈cl-2和Mcl-1作為相互作用網(wǎng)絡中的關(guān)鍵節(jié)點蛋白，在近十幾年中一直是制藥領(lǐng)域試圖以藥物“制導”的靶標蛋白。隨著靶向Bcl-2小分子藥物venetoclax的上市，研究人員逐漸將精力集中到了Mcl-1上。
　　但是，Bcl-2和Mcl-1不但在序列上具有同源性，結(jié)構(gòu)上也具有

2、相似性，都是通過蛋白表面的四個疏水口袋P1、P2、P3、P4與促凋亡成員發(fā)生相互作用。這就為靶向Mcl-1小分子抑制劑的設(shè)計帶來了困難。
　　本課題組通過對Mcl-1與不同配體的晶體結(jié)構(gòu)以及某些可以靶向Mcl-1的小分子抑制劑的構(gòu)效關(guān)系進行分析和研究，發(fā)現(xiàn)Mcl-1的P2相比于Bcl-2/Bcl-xL大且深，并且用疏水性基團占據(jù)P2這個疏水口袋更有利?；贛cl-1的P2的結(jié)構(gòu)特點，本研究首次采用動態(tài)連接篩選這一基于碎片篩選的新策

3、略，以熒光偏振實驗作為檢測手段，設(shè)計并合成了2個3-吡唑羧酸類分子作為母體分子，對3個理化性質(zhì)不同碎片，即苯甲醛，肉桂醛和4-芐氧基苯醛進行篩選。動態(tài)連接篩選的結(jié)果表明，碎片越大對Mcl-1的親和力越強。
　　為了確認動態(tài)連接篩選適用于靶向Mcl-1小分子抑制劑的研發(fā)并獲得以母體結(jié)構(gòu)為骨架的占據(jù)P2的小分子工具，本研究通過將2個母體分子和3個碎片分子分別合成在一起并進行活性評價，再將連接后的分子活性與篩選結(jié)果進行對比。結(jié)果表明，合

4、成的A/B兩系列6個小分子化合物與Mcl-1結(jié)合的親和力基本符合動態(tài)連接篩選的趨勢。并且，在A、B兩系列分子中，B3對Mcl-1的親和力最強，已經(jīng)達到了66 nM，是非常優(yōu)秀的研究Mcl-1的小分子工具。
　　通過對A/B兩系列小分子的配體效率以及分子對接結(jié)果進行分析，我們認為，Mcl-1的P2口袋是實現(xiàn)選擇性的關(guān)鍵位點并確證以疏水性基團占據(jù)此位點對親和力與選擇性的提高都非常有利。更重要的是，我們開發(fā)了基于熒光偏振實驗的動態(tài)連接篩