乙酰膽堿酯酶抑制劑的篩選研究.pdf

1、近年來,現(xiàn)代分析技術尤其是液相色譜-質譜聯(lián)用(LC-MS)技術得到了迅速發(fā)展。其在天然藥物化學、藥物分析、藥物篩選及中藥現(xiàn)代化等領域的廣泛應用均極大地促進了相關學科的發(fā)展。本文以乙酰膽堿酯酶抑制劑為研究對象,發(fā)展了基于固定化酶的乙酰膽堿酯酶抑制劑體外篩選模型和基于液質聯(lián)用分析的乙酰膽堿酯酶抑制劑的快速篩選方法。為我國藥用生物的真?zhèn)舞b別和活性成分快速發(fā)現(xiàn)研究提供了方法學參考。主要研究內容及結果簡述如下:
　　1.以可重復使用的固定化

2、酶代替游離態(tài)酶,建立一種基于比色分析的乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChEIs)體外篩選模型。采用以氨基化硅膠為載體固定的AChE,首先對實驗條件進行優(yōu)化,并用AChEIs陽性對照物他克林和毒扁豆堿對篩選模型進行驗證,還對篩選模型技術參數(shù)進行評價,最后將新方法用于單體化合物及天然產(chǎn)物粗提物AChE抑制活性評價。結果表明,方法驗證及篩選模型技術參數(shù)評價結果良好,篩選模型對AChEIs篩選有較好的特異性和靈敏度,可以用于AChEIs的篩選。該方法具

3、有適用性強、篩選結果可靠、固定化酶可以重復使用等優(yōu)點,是單體化合物及天然產(chǎn)物粗提物AChEIs活性評價的有效方法。
　　2.首次建立了液相-離子阱質譜法(LC-ESI-Trap/MS)篩選乙酰膽堿酯酶抑制劑(他克林和毒扁豆堿)的新方法。首先,發(fā)展適用于他克林和毒扁豆堿的色譜、質譜分析方法,接著對抑制劑洗脫條件進行了系統(tǒng)優(yōu)化,并在此基礎上探索性的發(fā)展了基于靶酶親和分離-液質聯(lián)用分析篩選、鑒別乙酰膽堿酯酶抑制劑的新方法。其次,采用本研