水蛭素、丹參總酮影響體外模擬人增生性瘢痕模型的實驗研究.pdf

1、增生性瘢痕是創(chuàng)傷后，尤其是深度燒傷后最常見的一種病理性愈合現(xiàn)象。實質(zhì)是以成纖維細胞為主的細胞增殖、活性增強，產(chǎn)生大量的膠原蛋白，使含Ⅰ、Ⅲ型膠原為主的細胞外基質(zhì)成分在組織中大量沉積，而難以被機體吸收或重塑的病理狀態(tài)。目前所知與外傷、燒傷、手術(shù)、感染、異物、機體局部膠原代謝失調(diào)、遺傳及局部免疫功能等多種因素有關(guān)。臨床上常用的治療方法：手術(shù)治療、加壓療法、硅膠薄膜敷貼、局部激素注射治療、冷凍治療、激光療法和其它藥物治療，多方法聯(lián)合治療效果較

2、好。盡管這些治療方法在不同程度上可以減輕癥狀，但是存在著一定的局限性及各種副作用，很難獲得理想的治療效果。因此尋求有效地防治增生性瘢痕的方法是創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的重要課題。中藥治療增生性瘢痕具有來源廣泛，價格低廉，長期使用毒副作用輕微等特點，但其療效不很確切，機制多不清楚，有待于進一步探討。本實驗在前期研究基礎(chǔ)上觀察水蛭素及丹參總酮對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞的抑制作用，為臨床上防治增生性瘢痕提供實驗依據(jù)。 目的：通過研究不同濃

3、度水蛭素和丹參總酮對體外培養(yǎng)的人增生性瘢痕成纖維細胞的增殖、分泌等功能的影響，為臨床用藥提供理論依據(jù)。 方法：取10例患者增生性瘢痕標(biāo)本共21塊，其中男性6例，女性4例，年齡9個月-26歲。用組織塊法將人增生性瘢痕組織進行體外培養(yǎng)，并建立含增生性瘢痕成纖維細胞的膠原網(wǎng)架，取4—7代培養(yǎng)的增生性瘢痕成纖維細胞分組，分別加入水蛭素和丹參總酮溶液，使其終濃度達到水蛭素0u/ml、1u/ml、10u/ml、50u/ml，丹參總酮O ug

4、/ml、1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml，并在藥物作用后的不同時間點進行指標(biāo)檢測。檢測指標(biāo)：二維培養(yǎng)系統(tǒng)：①倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，②MTT法檢測細胞活力及細胞計數(shù)，③酶聯(lián)免疫吸附實驗測定細胞分泌FGF-β1情況，④逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測細胞Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA；三維培養(yǎng)系統(tǒng)：①倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，②MTT法檢測細胞活力，③測定凝膠塊收縮指數(shù)④逆轉(zhuǎn)錄PCR法檢測細胞Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA。 結(jié)果：

5、 1.平面培養(yǎng)實驗結(jié)果：①水蛭素、丹參總酮溶液可使：HSFB變小變圓，胞間隔變寬，貼壁數(shù)量減少；②水蛭素、丹參總酮溶液可明顯抑制HSFB的增殖及活力，并且丹參總酮溶液對細胞的抑制率與藥物作用時間及濃度均存在著正相關(guān)作用；③水蛭素、丹參總酮溶液可抑制HSFB分泌FGF-β1，且抑制強度與藥物濃度成正相關(guān)。④水蛭素、丹參總酮溶液可抑制HSFB Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA的表達。 2.三維培養(yǎng)實驗結(jié)果：①水蛭素、丹參溶液可使HSF