肝素對(duì)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞及兔耳增生性瘢痕影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：瘢痕是燒傷整形外科的常見(jiàn)病，其發(fā)生機(jī)理比較復(fù)雜，目前尚無(wú)突破性進(jìn)展。增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是常見(jiàn)的病理性瘢痕，目前尚無(wú)特效的治療方法。增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的治療也非常棘手。目前研究證明，瘢痕是組織損傷后常見(jiàn)的并發(fā)癥，組織損傷創(chuàng)面愈合是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，它包括細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的合成等方面，膠原蛋白、bFGF和TGF β<,1>等均參與了組織損傷后發(fā)生的炎癥反應(yīng)過(guò)程，并與瘢痕形成關(guān)系密切。生長(zhǎng)因子是一組在創(chuàng)面愈合中發(fā)揮重要作

2、用的蛋白，是目前研究的熱點(diǎn)內(nèi)容之一．有資料表明肝素不但可以影響成纖維細(xì)胞的增殖和膠原的產(chǎn)生，作為一種創(chuàng)面愈合的調(diào)節(jié)因子，它還可以通過(guò)改變bFGF和TGF β<,1>來(lái)調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的增殖和膠原蛋白的表達(dá)，可能是一種抑制組織纖維化，治療瘢痕增生的新藥物。 目的：研究不同濃度肝素對(duì)人的正常皮膚和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的bFGF，TGF β 1和bFGF mRNA，TGF β lmRNA的表達(dá)的作用，對(duì)于兔耳增生性瘢痕的膠原蛋白，bFG

3、F和TGFβ<,1>的表達(dá)的影響，從而闡明肝素對(duì)增生性瘢痕的作用，為臨床上應(yīng)用肝素治療瘢痕增生提供新的方法。 方法：用組織塊法將人的正常皮膚和增生性瘢痕組織進(jìn)行體外培養(yǎng)，取3-4代培養(yǎng)的正常皮膚和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞分為4組，分別置于含Oμg/ml(A組)，100μg/ml(B組)， 300μg/ml(C組)和600μg/ml(D組)濃度的肝素的無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集細(xì)胞，通過(guò)ELISA和RT-PCR的方法分別檢測(cè)用藥后24，

4、 48，72和96小時(shí)的兩種細(xì)胞bFGF，F(xiàn)GF β<,1>和bFGFmRNA和TGF β lmRNA表達(dá)的水平。 選擇健康成年新西蘭大白兔48只，3﹪戊巴比妥鈉(1.5mg/kg)腹腔麻醉后，在兔耳腹側(cè)面制作創(chuàng)面，構(gòu)建兔耳增生性瘢痕模型。術(shù)后第21天，待增生性瘢痕形成后，隨機(jī)分為A，B，C，D四組，每一組12只。A組為對(duì)照組，不用藥，B，C，D三組為實(shí)驗(yàn)組分別按照100μ/kg，200u/kg，400u/kg劑量靜脈滴注，每日

5、兩次，連用7天。在停藥后1天、3天、7天、14天、21天、30天和40天取材，一份放于10﹪中性福爾馬林固定，另一份置于-80度冰箱保存。取材后，固定，切片，計(jì)算瘢痕增生指數(shù)。做免疫組化染色，觀(guān)察collagen Ⅰ(Ⅰ型膠原)，collagenⅢ(Ⅲ型膠原)，用計(jì)算機(jī)圖像分析后，計(jì)算表達(dá)指數(shù)(expression index， EI)和Ⅰ/Ⅲcollagen比值；比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間及在不同時(shí)相點(diǎn)collagen Ⅲ、collage

6、nlII、Ⅰ/Ⅲcollagen比值的表達(dá)水平的不同及變化規(guī)律。通過(guò)ELISA的方法分別檢測(cè)用藥后1天、3天、7天、14天、21天、30天和40天兔耳增生性瘢痕中的bFGF和TGF β 1表達(dá)水平。測(cè)定結(jié)果以x±S表示，數(shù)據(jù)應(yīng)用Microsoft Excel軟件處理，作組間、組內(nèi)t檢驗(yàn)，P<0.05即定位差異有顯著性意義。 結(jié)論：肝素能夠促進(jìn)人正常皮膚和增生性瘢痕成纖維細(xì)胞bFGF和bFGFmRNA表達(dá)水平明顯升高，輕度上調(diào)TG