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1、目的:分析注射皮膚勻漿對(duì)增生性瘢痕的影響,探討注射皮膚勻漿是否能夠成功進(jìn)行皮膚組織的移植、補(bǔ)充增生性瘢痕組織中的表皮干細(xì)胞。
方法:1.新西蘭大耳兔15只,在兔耳腹側(cè)制造增生性瘢痕模型,共獲得增生性瘢痕模型90個(gè),隨機(jī)分為皮膚勻漿組(A組)、生理鹽水組(B組)、空白對(duì)照組(C組)三個(gè)組,每組30個(gè)。
2.皮膚勻漿制作:于兔子背部取大小約4×8 cm2區(qū)域備皮,切取全厚皮片,將其修剪為微粒皮,加入生理鹽水,繼續(xù)修剪成糊
2、狀,皮膚勻漿制作完成。
3.增生性瘢痕處理:A組予注射皮膚勻漿,B組予注射生理鹽水,C組不予特殊處理。
4.大體觀察:分別于治療后3天、5天、7天、14天、21天、28天測(cè)量增生性瘢痕厚度的變化。
5.標(biāo)本收集:分別于治療后3天、5天、7天、14天、21天、28天取病變區(qū)組織小塊,石蠟包埋保存。
6.實(shí)驗(yàn)檢測(cè):行常規(guī)病理組織學(xué)檢查,并且采用免疫組化方法檢測(cè)各組組織標(biāo)本表皮干細(xì)胞標(biāo)志分子K19、P6
3、3的表達(dá)。
7.觀察比較各組增生性瘢痕厚度、組織結(jié)構(gòu)及K19、P63陽(yáng)性細(xì)胞百分率的變化。
8.將所得數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS20.0進(jìn)行分析,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行多個(gè)樣本均數(shù)比較的方差分析,以p<0.05作為判斷差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果:1.大體觀察:測(cè)量增生性瘢痕厚度,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。注射后,A、B兩組增生性瘢痕平均厚度增加,隨后均變薄。C組增生性瘢痕隨時(shí)間增加而變薄。
2.常規(guī)病理組織學(xué)觀察:行HE染色增生
4、性瘢痕組織內(nèi)可見(jiàn)大量的成纖維細(xì)胞、炎性細(xì)胞及新生血管,成纖維細(xì)胞主要分布在新生血管周圍,可見(jiàn)膠原纖維無(wú)規(guī)則排列。A組:增生性瘢痕組織內(nèi)可見(jiàn)注射的皮膚勻漿,毛囊、皮脂腺等皮膚附屬器清晰可辨,存活良好。
3.特殊染色觀察:通過(guò)免疫組織化學(xué)染色后,表皮干細(xì)胞分子標(biāo)記物K19、P63表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于表皮基底層。A組增生性瘢痕組織內(nèi)K19、P63陽(yáng)性細(xì)胞百分率明顯高于B、C兩組,p<0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:1
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