增生性瘢痕動(dòng)物模型的建立及其形成過(guò)程的動(dòng)態(tài)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、盡管國(guó)內(nèi)外學(xué)者長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)增生性瘢痕(hypertrophicscar，HS)進(jìn)行了大量、不懈的研究，但有關(guān)HS的形成機(jī)制目前還不清楚，臨床上也缺少特別有效的防治手段，造成這種局面的原因之一就是缺少一種理想的HS動(dòng)物模型。只有人才會(huì)自然發(fā)生HS，這是HS的特征之一，依據(jù)“內(nèi)因是事物發(fā)展的根據(jù)，它決定著事物發(fā)展的基本趨向”這一自然辯證法則，我們推測(cè)HS的形成是人類皮膚的某種或某些內(nèi)在的因素所決定的，因此通過(guò)將人皮膚移植于裸鼠的方法可以建立H

2、s動(dòng)物模型。本課題研究旨在通過(guò)移植人皮膚于裸鼠體表建立HS動(dòng)物模型，較系統(tǒng)地觀察瘢痕形成病理過(guò)程，并就瘢痕增生的形成機(jī)制進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，主要結(jié)果與結(jié)論如下： 1.人全厚皮片移植于裸鼠體表后會(huì)發(fā)生一定程度的排斥反應(yīng)，移植皮片的表皮及部分真皮逐漸脫落。但由于裸鼠是T細(xì)胞免疫缺陷動(dòng)物，這種排斥反應(yīng)發(fā)生遲，程度較輕，移植人皮片的真皮層部分得以存活，并成為移植皮片干痂脫落后瘢痕增生的基礎(chǔ)。我們的結(jié)果一方面說(shuō)明裸鼠體內(nèi)存在非T細(xì)胞依賴的免

3、疫機(jī)制，另一方面說(shuō)明長(zhǎng)期的慢性免疫反應(yīng)可能是瘢痕增生的促進(jìn)因素。 2.移植人全厚皮片的表皮及部分真皮脫落后，局部可以發(fā)生明顯的瘢痕增生，該瘢痕無(wú)論在大體外觀、增生特性還是病理組織學(xué)特性上都與人的HS相似。 3.用免疫組織化學(xué)的方法研究模型瘢痕中的TGFβ-1的變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)增生期模型瘢痕中TGF-β1持續(xù)高水平表達(dá)，而消退期則顯著降低。 4.體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，模型瘢痕成纖維細(xì)胞與人HS成纖維細(xì)胞形態(tài)上非常

4、相似，細(xì)胞增殖及膠原合成活性亦無(wú)顯著差別。 5.對(duì)比模型瘢痕組織以及正常皮膚中膠原酶活性，發(fā)現(xiàn)增生期的模型瘢痕膠原酶活性低，表明模型瘢痕中膠原等細(xì)胞外基質(zhì)降解減少。 6.以模型瘢痕組織和正常人皮膚組織及人HS組織的DNA為模板進(jìn)行PCR，結(jié)果發(fā)現(xiàn)都可以擴(kuò)增出入源性特異性基因，說(shuō)明模型瘢痕組織中肯定存在有人源性DNA。 7.只有移植人的全厚皮片才會(huì)發(fā)生明顯的瘢痕增生，而移植人的刃厚皮片以及大鼠的全厚皮片則根本不發(fā)生

5、瘢痕增生，移植人中厚皮片雖然部分可以發(fā)生一定程度的瘢痕增生，但增生程度及發(fā)生率均明顯不如移植人的全厚皮片。這說(shuō)明人皮膚真皮層是HS發(fā)生的決定因素。本發(fā)現(xiàn)在人體外證實(shí)了只有人皮膚才會(huì)發(fā)生HS這一現(xiàn)象，并證明了人皮膚真皮層是HS發(fā)生的決定因素，而不是表皮層或其他外界環(huán)境因素，進(jìn)一步揭示了HS的發(fā)生機(jī)制。 上述結(jié)果表明，人皮膚移植于裸鼠后會(huì)發(fā)生一定程度的排斥反應(yīng)，排斥反應(yīng)的發(fā)生使移植的人皮膚的表皮及部分真皮壞死脫落，但仍有部分真皮存活

6、，存活的這部分人真皮是HS發(fā)生的基礎(chǔ)。真皮中的人成纖維細(xì)胞在局部炎性反應(yīng)的持續(xù)刺激下功能狀態(tài)發(fā)生改變，細(xì)胞增殖旺盛，并合成大量的膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，從而導(dǎo)致瘢痕的持續(xù)增生。該模型瘢痕增生明顯，增生持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，瘢痕的大體形態(tài)、生長(zhǎng)特性、組織學(xué)特點(diǎn)等都和人HS相似，具有很好的代表性，可用于瘢痕形成機(jī)制及臨床防治的相關(guān)研究。 結(jié)論： 1.通過(guò)在裸鼠背部體表移植人全厚皮片的方法可以建立HS動(dòng)物模型； 2.人皮膚移植于裸鼠體