新型粉防已堿衍生物H1誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡及自噬的研究.pdf

1、研究目的
　　腫瘤因其高發(fā)病率和高死亡率，目前已經(jīng)成為威脅人類生命健康的主要病因。但傳統(tǒng)的治療腫瘤的方法非常有限，主要包括手術(shù)、化療和放療。其中化療主要是通過(guò)化療藥物殺傷或抑制腫瘤細(xì)胞達(dá)到治療腫瘤的目的，但是化療藥物同時(shí)對(duì)正常組織或器官也產(chǎn)生損害或毒性作用。因此開(kāi)發(fā)特異地靶向腫瘤細(xì)胞的化療藥物已迫在眉睫。
　　粉防己堿（tetrandrine）是一類主要存在于防己科植物塊根中的雙芐基異喹啉生物堿，研究顯示粉防己堿具有抗腫瘤作

2、用。H1是由四川大學(xué)王鋒鵬教授在粉防己堿的基礎(chǔ)上合成的一種新型的衍生物，因其在結(jié)構(gòu)上進(jìn)行了一定的優(yōu)化，所以H1具有更好的抗腫瘤效果。本篇論文旨在研究H1對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡和自噬的影響并進(jìn)一步闡明其分子機(jī)制。
　　研究方法
　　1.腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
　　2.磺酰羅丹明B(SRB)比色法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖
　　3.WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白水平的變化
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
　　5.

3、RNA干擾抑制相關(guān)基因的表達(dá)
　　6.在熒光顯微鏡下采用EGFP-LC3B融合蛋白來(lái)示蹤自噬的發(fā)生
　　研究成果
　　新型粉防己堿衍生物H1誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡的研究
　　1.H1抑制A549、Calu-1、H1792、H157、H460這五種人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖，并且呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　2.H1激活Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中的凋亡蛋白酶caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。
　　3.H1

4、上調(diào)Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中死亡受體DR5的表達(dá)，KnockdownDR5保護(hù)細(xì)胞免于H1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　4.H1激活Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，上調(diào)CHOP的表達(dá)。
　　5.在Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中KnockdownCHOP，抑制H1上調(diào)DR5，進(jìn)而抑制H1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　6.H1下調(diào)Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中的c-FLIP蛋白水平，

5、過(guò)表達(dá)c-FLIP保護(hù)細(xì)胞免于H1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　新型粉防己堿衍生物H1誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞自噬的研究
　　1.H1上調(diào)Calu-1、A549、H1792細(xì)胞中的MAP1LC3B-Ⅱ。
　　2.H1誘導(dǎo)Calu-1-EGFP-MAP1LC3B細(xì)胞發(fā)生熒光聚集。
　　3.在Calu-1細(xì)胞中，KnockdownATG5或ATG7抑制H1誘導(dǎo)的MAP1LC3B-Ⅱ上調(diào)。
　　4.在Calu-1-EGFP-MAP1

6、LC3B細(xì)胞中，KnockdownATG5或ATG7抑制H1誘導(dǎo)的熒光聚集。
　　5.自噬抑制劑LY294002和E64d有效的抑制了H1誘導(dǎo)的自噬。
　　6.在Calu-1細(xì)胞中，KnockdownATG5或ATG7促進(jìn)H1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論
　　1.H1誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤目的;
　　2.H1激活ERstress，通過(guò)誘導(dǎo)CHOP上調(diào)繼而上調(diào)DR5的表達(dá)最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;

7、r>　　3.抗凋亡蛋白c-FLIP參與H1誘導(dǎo)的肺癌細(xì)胞凋亡;
　　4.H1誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞發(fā)生自噬;
　　5.在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中，抑制H1誘導(dǎo)的自噬增強(qiáng)H1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)H1通過(guò)誘導(dǎo)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤目的。并且進(jìn)一步闡述了H1誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。H1通過(guò)激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，上調(diào)連接內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵分子CHOP，進(jìn)而誘導(dǎo)死亡受體DR5的上調(diào)，最終誘導(dǎo)細(xì)