門冬酰胺酶誘導小細胞肺癌細胞自噬并抑制其生長.pdf

1、目的：
　　逐年來肺癌發(fā)病率可謂有增無已，其死亡率之高也在各類癌癥排行榜單中名列前茅。為了戰(zhàn)勝肺癌，人類從未放緩探究先進、有效療法的腳步。在看到不俗成績的同時我們也清楚，肺癌治療仍存有較大進步、發(fā)展的空間，等待我們?nèi)ビ眯奶钛a。小細胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）據(jù)悉僅占各類肺癌總數(shù)五分之一左右，但考慮它早期即可轉移、侵襲擴散范圍較廣、復發(fā)幾率較大等特性，SCLC仍是臨床上最難攻克、最不愿面對的惡性病

2、變之一。放化療是SCLC的經(jīng)典、常規(guī)療法，但是客觀來說該療法不僅療效較為有限、易繼發(fā)強耐藥，還會誘發(fā)、伴隨令病患身心受創(chuàng)的毒副作用。針對眼下這種狀況，研發(fā)探求一種全新的、療效優(yōu)異的、毒副作用小的藥物已迫在眉睫。門冬酰胺酶(asparaginase，AN)是以氨基酸代謝療法為依托的代表性酶療藥物。目前AN已經(jīng)在多篇腫瘤相關的文獻報道中亮相，揭示其獨特的、高效的藥用價值。尤其值得一提的是，在遙遠的20世紀70年代中期AN就已逐步應用于白血病

3、的一線臨床。既然AN對于血液腫瘤，甚至對多種實體瘤都具有如此奪目療效，那么對于SCLC而言AN是否同樣具有藥用價值呢？目前尚未發(fā)現(xiàn)相關針對性報道。本課題組為了驗證AN對小細胞肺癌療效，甄選兩株SCLC細胞系——H1688、H446為實驗對象進行連續(xù)性研究，旨在為AN治療SCLC提供基礎理論依據(jù)，也為相關轉化醫(yī)學的系統(tǒng)研究提供參考。
　　方法:
　　通過MTT法檢測AN單用或聯(lián)用自噬抑制劑氯喹(chloroquine，CQ)后

4、H1688和H446細胞的增殖抑制率;通過臺盼藍染色法檢測AN單用或聯(lián)用CQ后H1688和H446細胞的死亡率;免疫熒光法觀察AN作用后自噬標記物LC3蛋白表達并示蹤自噬體形成;Western blot檢測AN干預H1688細胞后自噬相關蛋白LC3和AKT/mTOR信號通路蛋白mTOR、AKT、70S6K表達。
　　結果：
　　AN可以抑制H1688和H446細胞增殖、促進其死亡，且呈濃度依賴性(p＜0.05);AN處理后可

5、以明顯增加H1688和H446細胞自噬小體數(shù)量，誘導LC3-Ⅱ表達;CQ可以增強AN對H1688和H446細胞的殺傷作用(p＜0.05);AN干預H1688細胞后p-mTOR、p-Akt、p-70S6K蛋白表達水平有所降低。
　　結論：
　　(1)AN可以抑制H1688和H446細胞生長;
　　(2)AN可以誘導H1688和H446細胞自噬;
　　(3)阻斷自噬可以增強AN對H1688和H446的細胞毒性作用;<