穿心蓮內酯衍生物ADA誘導人乳腺癌和肺癌細胞凋亡的機制研究.pdf

1、肺癌已成為中國發(fā)病率最高的惡性腫瘤，而乳腺癌是女性惡性腫瘤發(fā)病率的首位。過去研究者把重點放在細胞分化與分裂方面，并沒有重視細胞死亡與腫瘤發(fā)生的關聯(lián)?，F(xiàn)有研究表明細胞增殖過度是因為細胞自身清除能力下降，即本應該發(fā)生凋亡的細胞并未發(fā)生凋亡。
　　穿心蓮為爵床科（Acanthaceae）植物穿心蓮（Andrographis paniculata（Bum.f.）Nees）的干燥地上部分，具有清熱解毒、涼血消腫之功效，在亞洲有廣泛的應用，享

2、有“苦味之王”的稱號。近年來研究發(fā)現(xiàn)，以穿心蓮內酯為代表的二萜內酯類成分具有廣譜的抗腫瘤作用。本文研究了穿心蓮內酯衍生物ADA對人乳腺癌MCF-7細胞和人肺A549細胞的增殖抑制作用，并通過對腫瘤細胞凋亡的影響探討其作用機制。采用四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測細胞增殖。DAPI、吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）雙染法以及Annexin V-FITC/PI雙染法流式細胞術測定細胞凋亡。羅丹明123檢測細胞線粒體膜電位變化。Western bo

3、lt法檢測NF-κB信號通路相關蛋白NF-κB p65核位移、IκBɑ、磷酸化IκBɑ、磷酸化IKKβ的表達以及凋亡通路中相關蛋白Bcl-2、Bax、細胞色素C和caspase3的表達。
　　MTT結果顯示，不同濃度ADA和穿心蓮內酯A作用24h后，均能抑制MCF-7和A549細胞增殖。ADA對A549細胞IC50為（9.65±1.50）μM，對MCF-7細胞IC50為（6.4±3.29）μM。A對A549細胞IC50為(25.4

4、9±4.02)μM，對MCF-7細胞IC50為(19.5±2.82)μM，此數(shù)據(jù)表明ADA對于兩種腫瘤細胞的增殖抑制作用顯著優(yōu)于先導化合物A，表明ADA比其母體A具有更強的抗乳腺癌和抗肺癌活性。
　　DAPI、AO/EB染色結果表明：與空白對照組相比ADA加藥組細胞形態(tài)出現(xiàn)明顯變化如細胞核缺失，染色質固縮，細胞邊緣化等細胞凋亡特征。AO/EB染色圖顯示，ADA加藥組與空白對照組細胞相比細胞核發(fā)出橘色熒光，EB的熒光強度隨著給藥濃度

5、的增加顯著增強(P＜0.01)，表明細胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)特征。
　　羅丹明123（Rh123）結果表明：經(jīng)過ADA作用24h后，Rh123熒光隨著藥物濃度的增加顯著降低（P＜0.01），表明MCF-7和A549細胞線粒體膜電位降低，膜電位降低被認為是細胞凋亡發(fā)生的標志。表明腫瘤細胞因為發(fā)生凋亡而失去與羅丹明123結合的能力。
　　流式細胞術結果表明：當ADA濃度為4μM、8.5μM、10μM時，A549細胞凋亡率分別為為6.41

6、％±2.51，9.28％±1.86，21.85％±7.75，32.46％±7.61；當ADA濃度為2μM、4μM、6μM時，MCF-7細胞凋亡率為4.34％±1.12，21.22％±2.09，32.46％±7.61，19.06％±1.23。ADA作用24h后腫瘤細胞凋亡率均顯著增加(P＜0.01)，表明ADA能夠誘導人乳腺癌細胞MCF-7與肺癌細胞A549凋亡。
　　Western blot實驗結果表明：MCF-7和A549細胞細

7、胞色素C被刺激釋放，caspase3被激活且表達增加(P＜0.01)；促凋亡蛋白Bax的表達增加（P＜0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2的表達降低（P＜0.05），提示ADA參與細胞色素C、Bax、Bcl-2、caspase3的調控，同時磷酸化IκBɑ、磷酸化IKKβ、細胞核內NF-κB p65表達均降低（P＜0.01)，細胞質內p65表達增加(P＜0.01)，表明ADA也參與NF-κB信號通路的調控。
　　綜上所述，穿心蓮內酯衍生