三氮唑席夫堿衍生物對人肝癌細胞誘導分化與凋亡作用的研究.pdf

1、文獻報道多種含有三氮唑結(jié)構的化合物具有潛在的抗癌活性，能夠抑制細胞增殖，阻滯腫瘤細胞周期進程，干擾微管的運動，抑制微管聚合，誘導腫瘤細胞凋亡及終末分化，這些作用已引起國內(nèi)外藥物研究和開發(fā)領域的高度重視。本課題以人肝癌細胞株BEL-7402為研究對象，利用胡國強博士設計并合成的系列三氮唑衍生物進行藥物篩選和作用機制的初步探討。為在腫瘤治療領域開發(fā)應用該類化合物提供一定的實驗依據(jù)。 目的：通過對21種三氮唑席夫堿衍生物的初步篩查，尋

2、找對BEL-7402細胞增殖有顯著抑制作用的化合物，進一步對其作用機制進行初步研究，為該類化合物的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。 方法：MTT法進行藥物初步篩查；流式細胞術PI單色標記法檢測細胞周期的改變；流式細胞術FITC-AnnexinV/PI雙色標記法檢測細胞凋亡情況；熒光顯．微技術Hoechst33258染色觀察凋亡細胞形態(tài)學變化；免疫細胞化學方法檢測細胞內(nèi)激活型Caspase-3蛋白表達情況；Western-blotting

3、檢測細胞凋亡相關蛋白表達的變化；RT-PCR法檢測細胞分化相關基因表達的改變；放射免疫法檢測細胞分化相關蛋白水平變化；酶學方法檢測細胞內(nèi)過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及堿性磷酸酶(ALP)活性改變。 結(jié)果：MTT法測21種化合物對肝癌細胞株BEL-7402細胞增殖的作用。發(fā)現(xiàn)LH-36，LH-37，LH-38，LH-39四種化合物具有顯著的細胞增殖抑制作用。其中LH-37，LH-38在0.1umol/L-100u

4、mol/L，的濃度范圍內(nèi)能顯著抑制肝癌細胞增殖而且呈濃度、時間依賴關系。作用于細胞48 h的IC<,50>值低，分別是302.7umol/L,4.61 umol/L；細胞周期阻滯在G<,1>/S期。0.1umol/L-100 umol/L的濃度范圍內(nèi)LH-37，LH-38作用BEL-7402細胞48 h，凋亡細胞數(shù)量顯著增加。Caspase-3，Caspase-9，P53蛋白表達量高于正常培養(yǎng)組，Bcl-2蛋白表達量不變。激活型Casp

5、ase-3表達陽性細胞數(shù)高于對照組。細胞甲胎蛋白(a-FP)mRNA表達量明顯降低，白蛋白(Alb)mRNA表達量增高，a-FP蛋白分泌量降低，Alb蛋白分泌量增高。細胞內(nèi)過氧化氫酶活性降低，超氧化物歧化酶及堿性磷酸酶活性均增高。 結(jié)論： 1.LH-37，LH-38具有抑制肝癌細胞增殖，阻滯細胞周期進程作用，LH-38抑制作用呈濃度和時間依賴性。 2.LH-37，LH-38在IC<,50>值濃度有誘導BEL-74