激活肝X受體通路上調(diào)干擾素伽馬表達(dá)并抑制腫瘤生長.pdf

1、干擾素伽馬(interferon gamma，IFN-γ)是一種多功能的細(xì)胞因子，具有殺菌、抗病毒和抑制腫瘤等功能，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中發(fā)揮多種重要的生物功能。IFN-γ主要由T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌，但其它細(xì)胞如巨噬細(xì)胞等也能夠表達(dá)和分泌IFN-γ。
　　LXRα/β(liver X receptorαandβ，肝X受體α和β)是配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子。LXR需要與RXR形成復(fù)合物，才能激活靶基因。LXRα主要在脂肪、肝臟和巨噬細(xì)胞中表

2、達(dá)，LXRβ則在大部分組織中表達(dá)。LXR的配體包括氧化型膽固醇如22(R)-hydroxycholesterol，以及人工合成的配體如T0901317和GW3965等。與配體結(jié)合后，LXR能夠與另一轉(zhuǎn)錄因子RXR(retinoid X receptor，類視黃醇X受體)形成LXR/RXR復(fù)合物。LXR/RXR復(fù)合物能夠與目的基因啟動子上的LXRE(LXR-responsive element，LXR結(jié)合序列，或稱為directed re

3、peat4，直接重復(fù)4，DR4)相結(jié)合，從而啟動靶基因的轉(zhuǎn)錄。LXRE的序列為AGGTCAn4 AGGTCA。LXR在脂質(zhì)合成和代謝中發(fā)揮重要作用，然而近來發(fā)現(xiàn)LXR在免疫系統(tǒng)中也具有重要的作用。它能夠維持天然免疫的功能，并且能夠抑制炎癥反應(yīng)。LXR缺失的巨噬細(xì)胞存在吞噬功能的障礙，在天然免疫中發(fā)揮的作用也較弱，敲除LXR的小鼠更易感染李斯特病菌。
　　作為機(jī)體內(nèi)兩個(gè)具有重要功能的分子，IFN-γ和LXR間的相互作用并不十分明確。

4、我們前期的序列分析發(fā)現(xiàn)，IFN-γ存在LXRE。基因芯片結(jié)果也顯示，LXR激動劑T0901317能夠上調(diào)巨噬細(xì)胞系IFN-γ mRNA的表達(dá)。據(jù)此我們推測，激活LXR可能調(diào)控干擾素伽馬的表達(dá)并發(fā)揮其免疫功能。針對這一設(shè)想我們展開本文中一系列研究，我們的研究結(jié)果顯示，T0901317能夠?qū)奘杉?xì)胞、劉易斯肺腫瘤(Lewis lung carcinoma cell，LLC1)細(xì)胞系和T細(xì)胞(EL-4)細(xì)胞系中上調(diào)IFN-γ表達(dá)，同時(shí)促進(jìn)IF

5、N-γ的分泌。當(dāng)用RNA干擾的方法降低LXR的兩種異構(gòu)體LXRα和LXRβ在巨噬細(xì)胞系(RAW細(xì)胞)中的表達(dá)后，IFN-γ的表達(dá)也隨之下調(diào)，且不再被T0刺激，說明T0對IFN-γ的調(diào)控作用依賴于LXR存在。
　　調(diào)控機(jī)制上，我們針對IFN-γ啟動子序列中的疑似的3個(gè)LXRE構(gòu)建了一系列啟動子，并通過熒光素酶報(bào)告基因檢測其活性，結(jié)果表明T0901317處理或LXR過表達(dá)皆能上調(diào)IFN-γ啟動子的活性。LXRE突變（一個(gè)或兩個(gè)）雖然能

6、夠大幅度降低IFN-γ啟動子的基礎(chǔ)活性，但對T0901317或LXR的表達(dá)載體依然產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。當(dāng)IFN-γ啟動子中3個(gè)LXRE突變后，無論T0901317還是LXR的表達(dá)載體都無法上調(diào)突變的IFN-γ啟動子活性。表明這3個(gè)LXRE在IFN-γ的轉(zhuǎn)錄中的關(guān)鍵作用。EMSA實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明了LXRE序列具有與LXR蛋白相結(jié)合的能力。ChIP實(shí)驗(yàn)也表明在RAW細(xì)胞核中，LXR與IFN-γ啟動子中LXRE的結(jié)合，經(jīng)過T0901317處理后，

7、細(xì)胞中LXR與IFN-γ啟動子上LXRE結(jié)合更加緊密。從以上結(jié)果可以看出，激活LXR能在轉(zhuǎn)錄水平上上調(diào)IFN-γ表達(dá)，并且該調(diào)控依賴于LXRE的存在。
　　在動物體內(nèi)，喂食含有T0901317的食物后，小鼠血清、肺組織和腹股溝淋巴節(jié)中IFN-γ的水平上升。IFN-γ具有抗腫瘤功能，由此我們推測激活LXR能抑制腫瘤生長。我們進(jìn)一步的結(jié)果證實(shí)了這一科學(xué)設(shè)想。小鼠在攝取了含有T0901317的食物后，移植的LLC1腫瘤的生長明顯受到抑制

8、，為了進(jìn)一步驗(yàn)證對腫瘤的抑制作用是否與IFN-γ相關(guān)，我們采用IFN-γ敲除(IFN-γ-/-)的小鼠進(jìn)行了肺腫瘤移植模型實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)LXR對IFN-γ-/-小鼠的腫瘤生長不存在抑制效果，說明在T0901317抑制腫瘤的過程中IFN-γ發(fā)揮了重要的功能。此外，我們采用3-甲基膽蒽/二丁基羥基甲苯(MCA/BHT)誘導(dǎo)的原位肺腫瘤模型進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)喂食T0901317食物能夠有效的防止和治療MCA/BHT所誘導(dǎo)的原位肺腫瘤。
　　綜上