RNA干擾抑制腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá).pdf

1、北京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文RNA干擾抑制腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)姓名：呂青申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)指導(dǎo)教師：王繼峰20050501RNA干擾技術(shù)抑制腫瘤細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)了一定的療效。最典型的藥物就是上世紀(jì)六十年代在日本造成胎兒畸形而被停用的“反應(yīng)?！??！胺磻?yīng)?！笨赡軐?dǎo)致胎兒的發(fā)育畸形，四肢發(fā)育不完全，產(chǎn)生“海豹足”，這種畸形的產(chǎn)生就是因?yàn)樵撍幬镆种屏伺咛グl(fā)育階段的微血管生成作用而產(chǎn)生的。但是這些方法的作用靶

2、點(diǎn)通常都是在微血管生成作用中的一些蛋白分子，如血管內(nèi)皮生長因子，血管內(nèi)皮生長因子受體等。這并不能從較根本的水平抑制微血管生成的作用?；蛩降闹委熞虼吮涣腥肓搜芯糠秶?。但是腫瘤導(dǎo)致的基因突變通常是多靶點(diǎn)的。首先，人們很難確定到底有多少基因突變在腫瘤發(fā)生過程中起了作用，其次，全部抑制或修復(fù)所有的基因突變在目前的科學(xué)水平還是不可行的。所幸的是，1998年，F(xiàn)ire和他的同事們在一次很偶然的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)了RNA干擾現(xiàn)象。其實(shí)，在更早的時(shí)候，

3、RNA干擾的現(xiàn)象已經(jīng)在植物中作為一種植物自身抗病毒的機(jī)制而被發(fā)現(xiàn)，但是未引起重視。經(jīng)過Tuschl，Barrel等人的卓著努力，RNA干擾的機(jī)制逐一被揭開?，F(xiàn)在RNA干擾已經(jīng)逐漸成為一種常規(guī)的基因“敲除”的手段。RNA干擾在腫瘤治療方面的研究也取得了重大的進(jìn)展。已經(jīng)有許多文章報(bào)道了用RNA干擾的方法抑制血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，我們實(shí)驗(yàn)小組也在致力于這方面的研究，并且取得一定的成果。體外實(shí)驗(yàn)表明RNA干擾能夠抑制90％以上的VEGF表達(dá)，

4、以及接近100％的蛋白水平表達(dá)。這顯然是一個(gè)很有前途的治療方式。但是目前仍有幾個(gè)難題擺在面前：第一，siRNA的穩(wěn)定性；第二，siRNA表達(dá)系統(tǒng)的安全性；第三，體內(nèi)轉(zhuǎn)染系統(tǒng)的效率已經(jīng)安全性；第四，給藥方法。RNA是一種較不穩(wěn)定的分子，雖然化學(xué)修飾的方法在一定程度上提高了siRNA的穩(wěn)定性，但是在體內(nèi)存在眾多酶的環(huán)境下，siRNA的作用時(shí)間仍然不夠理想。于是有人采用構(gòu)建siRNA表達(dá)系統(tǒng)通過腺病毒，反轉(zhuǎn)錄病毒或是慢病毒導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，這雖

5、然解決了siRNA穩(wěn)定性的問題，但是表達(dá)系統(tǒng)的安全性尚未在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得到報(bào)道。如果采用siRNA直接導(dǎo)入體內(nèi)的方法，轉(zhuǎn)染試劑則成為一個(gè)比較大的問題，許多體外轉(zhuǎn)染試劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，但是體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的效率和作用，尚未得到一致認(rèn)可。我們研究小組在siRNA的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，siRNA確能很大程度上抑制腫瘤的生長。最后給藥方式是最大的一個(gè)難題，對于表皮的腫瘤我們可以采取瘤內(nèi)注射的方法，但是對于機(jī)體深部的腫瘤卻沒有一種很好的傳遞機(jī)制。靜脈給藥是