GDNF與17β-Estradiol協(xié)同保護6-OHDA損傷的DA能神經細胞的作用機制的研究.pdf

1、目的:研究膠質細胞系源性神經營養(yǎng)因子(glia cell line-derived neurotrophicfactor,GDNF)與17β-Estradiol(E2)協(xié)同保護中腦黑質多巴胺(dopamine,DA)能神經細胞的作用,并探討PI3-K/Akt信號通路介導其協(xié)同保護作用的可能機制。
　　 方法:本研究以培養(yǎng)的新生1～3天的SD大鼠中腦黑質腦片為研究對象,腦片培養(yǎng)至7天時,碘化丙啶(PI)染色檢測培養(yǎng)腦片中細胞的活力

2、,并取細胞活力良好的腦片做后續(xù)實驗。首先以200μmol/L6-羥多巴胺(6-OHDA)作用于已培養(yǎng)7天的腦片1小時誘導細胞損傷,然后將培養(yǎng)的腦片分為8組:正常對照組、溶劑對照組、GDNF組、E2組、GDNF+E2組、Wortmannin(PI3-K特異性阻斷劑)+GDNF組、Wortmannin+E2組、Wortmannin+GDNF+E2組,各組腦片再培養(yǎng)15min后進行后續(xù)實驗,其中Wortmannin在GDNF或(和)E2加入前

3、1小時加入。免疫熒光雙標染色觀察黑質致密部(substantia nigracompacta,SNc)中酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)與Akt共表達情況;Western Blot方法檢測TH、p-Akt、Bcl-2、Bad、Procaspase-3的表達情況。
　　 結果:中腦腦片培養(yǎng)至第7天時,可見邊緣細胞清晰并有長的突起伸出,貼壁良好,PI染色結果顯示細胞活力較好;免疫熒光染色結果顯示腦片SN

4、c中有TH+細胞;免疫熒光雙標染色結果顯示SNc中所有TH+細胞均表達Akt,TH+/Akt+細胞為胞漿著色;Western Blot檢測結果顯示在GDNF+E2組,TH的表達比單用GDNF或E2時顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);GDNF+E2組中Bcl-2、Procaspase-3的表達比單用GDNF或E2時增高,而Bad的表達降低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);GDNF、E2及GDNF+E2組中Akt磷酸化水平都是升

5、高的,與相應的溶劑對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);所有加入Wortmannin組與相應的未加Wortmannin各組相比,TH、Bcl-2、Procaspase-3的表達是降低的,Bad的表達是升高的,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結論:在本實驗條件下,GDNF與E2對DA能神經細胞有協(xié)同保護作用;PI3-K/Akt信號通路介導了GDNF與E2的協(xié)同保護作用,其機制可能是通過調節(jié)其下游的凋亡調控因子Bcl