銀杏葉提取物對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的: 研究銀杏葉提取物（extract of ginkgo biloba, GBE）對(duì)6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine, 6-OHDA）誘導(dǎo)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤細(xì)胞（Rat pheochromocytoma cell line，PC12細(xì)胞）凋亡的保護(hù)作用及其可能的分子機(jī)理。
　　 方法: 經(jīng)神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞用普通高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，將培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞分為正常對(duì)照組（NS，完全DM

2、EM）, 6-OHDA組（6-OH，100 μmol/L 6-OHDA-完全DMEM）, GBE低劑量組（GL，10 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, GBE中劑量組（GM，20 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, GBE高劑量組（GH，40 μg/mL GBE-6-OHDA組培養(yǎng)液）, 左旋多巴對(duì)照組（levodopa，L-DP，20 μmol/L L-DOPA-6-OHDA組培養(yǎng)液）。用四甲基偶氮唑鹽(meth

3、yl thiazolyl tetrazolium,MTT) 比色法測(cè)定PC12細(xì)胞的活力；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定PC12細(xì)胞的凋亡百分比；Hoechst 33342熒光染色觀察凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化；分光光度法測(cè)定胞漿過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）的活性和總抗氧化能力（t

4、otal antioxidative capability，T-AOC）的水平；免疫印跡法測(cè)定胞漿內(nèi)p53、Bcl-2、Bax以及caspase-3的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定胞漿內(nèi)多巴胺（dopamine，DA）的含量；免疫印跡法和免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定細(xì)胞酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase，TH）活性的變化。
　　 結(jié)果: 與正常對(duì)照組相比，6-OHDA組的PC12細(xì)胞活力明顯降低，細(xì)胞凋亡百分比明顯升高

5、（P<0.05），較多細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)改變。與6-OHDA組相比，GBE低、中、高劑量組的PC12細(xì)胞活力增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡百分比顯著降低（P<0.05），且隨GBE濃度增加作用更明顯，典型的凋亡細(xì)胞核也逐漸減少；GM組和GH組CAT, GSH-Px, T-SOD的活性和T-AOC的水平均顯著提高 (P<0.05 or P<0.01)，GL組僅T-SOD的活性及T-AOC水平升高，而GSH-Px和CAT的活性無(wú)明顯變化(P>

6、0.05)，而L-DP對(duì)上述抗氧化指標(biāo)均無(wú)明顯作用(P>0.05)。GBE還能明顯升高PC12細(xì)胞TH的活性和胞內(nèi)DA的含量(P<0.05)。與6-OHDA組相比，GBE低、中、高劑量組Bcl-2的表達(dá)增加，Bax的表達(dá)降低，Bax/Bcl-2的比值明顯降低(P<0.05），p53和caspase-3 的表達(dá)降低(P<0.05），且均隨GBE劑量增加作用逐漸增強(qiáng)，L-DP組的Bax/Bcl-2的比值以及p53、caspase-3 的表達(dá)

7、也有所降低 (P<0.05)。
　　 結(jié)論: 6-OHDA能誘發(fā)PC12細(xì)胞凋亡；GBE能明顯抑制6-OHDA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡并對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用；GBE有很強(qiáng)的抗氧化能力，并能明顯降低Bax/Bcl-2的比值，抑制p53和caspase-3的活化。由此可見GBE可以通過(guò)其抗氧化作用明顯改善6-OHDA誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激狀態(tài)，糾正凋亡調(diào)節(jié)基因的異常表達(dá)及凋亡的重要執(zhí)行分子caspase-3的異常活化所致的線粒體凋亡信號(hào)通路異常，