銀杏葉提取物對高脂喂養(yǎng)胰島素抵抗大鼠胰島β細胞凋亡的保護作用.pdf

1、糖尿病患病率呈逐年迅速上升趨勢，已經(jīng)成為繼心血管疾病和腫瘤之后的第三大嚴重危害人類健康的疾病。胰島素抵抗是糖尿病的重要發(fā)病機制之一，與糖尿病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。針對其病理生理機制的干預(yù)治療對防治糖尿病有重要意義。隨著胰島素、促胰島素分泌劑、胰島素增敏劑等藥物的不斷開發(fā)與應(yīng)用，糖尿病的治療有了更多的手段。 盡管在糖尿病治療領(lǐng)域取得了不斷的進步，目前臨床上仍然缺乏有效的手段控制糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生與進展。預(yù)防糖尿病的發(fā)生，從根本上

2、消除糖尿病帶來的危害，成為最受人們關(guān)注的問題之一。但目前的預(yù)防手段都不同程度地面臨著患者依從性差、藥物的毒副作用大、價格昂貴等問題。因此，尋找更為有效、經(jīng)濟、不良反應(yīng)小的干預(yù)胰島素抵抗的藥物成為目前糖尿病防治研究的熱點。 銀杏葉提取物(Ginkgo Biloba Extract，EGb)現(xiàn)主要用于心腦血管及其并發(fā)癥的防治。而目前關(guān)于銀杏葉提取物對保護胰島素抵抗大鼠的胰島β細胞的作用尚未見研究報道。為此，我們應(yīng)用免疫組化、流式細胞

3、術(shù)等方法，研究銀杏葉提取物對胰島素抵抗大鼠的胰島β細胞凋亡的保護作用。 目的：本課題采用高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗大鼠模型，對胰島素抵抗大鼠的血清生化代謝等指標，以及胰島β細胞凋亡水平及其凋亡相關(guān)因素的影響進行研究，并以羅格列酮(rosiglitazone RSG)為對照藥，通過對銀杏葉提取物改善胰島素敏感性，保護胰島β細胞凋亡的作用及可能機制進行初步探討，為銀杏葉提取物預(yù)防糖尿病的發(fā)生發(fā)展作用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。

4、 方法：①40只Wistar大鼠隨機分為對照組(Normal Control NC組，n=10)和高脂組(High flat diet HF組，n=30)，對照組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，高脂組給予高脂飼料喂養(yǎng)4周，胰島素抵抗成模后，高脂組隨機分為高脂對照組(}typerlipidemia HL組)；高脂+羅格列酮組(HL+RSG組)，高脂+銀杏葉提取物組(HL+EGb組)。三組各10只，繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)4周。②于實驗第4周末、第8周末檢測

5、各組大鼠血清空腹血糖(FPG)，空腹血清胰島素(FINS)，計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，體重(BW)，血清甘油三脂(TG)，血清總膽固醇(TC)，游離脂肪酸(FFA)。③用流式細胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM、)和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP原位缺口標記技術(shù)(terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)dUTP nick endlabeling

6、，TUNEL)檢測胰島β細胞凋亡率，用免疫組化方法檢測各組大鼠胰島β細胞抗凋亡蛋白bcl-2和促凋亡蛋白bax的表達情況。 結(jié)果： 1、喂養(yǎng)4周后，高脂組成功誘導(dǎo)形成胰島素抵抗，血清總膽固醇、甘油三脂升高，游離脂肪酸升高，空腹血糖、空腹胰島素升高，胰島素抵抗指數(shù)升高，而胰島素敏感指數(shù)下降。與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，高脂組體重與對照組相比略有加重，但差異無統(tǒng)計學意義(0>0.05)。 2、實驗

7、8周后即給予藥物干預(yù)4周后，檢測各組體重，HL組雖略有增加，但與NC組相比，差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。與NC組相比，HL組空腹血糖、空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)上升，胰島素敏感指數(shù)下降，血清游離脂肪酸升高，血清總膽固醇、甘油三脂升高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。與HL組相比，HL+EGb組、HL+RSG組空腹血糖、空腹胰島素、胰島素抵抗指數(shù)降低，胰島素敏感指數(shù)上升，血清游離脂肪酸下降，血清總膽固醇、甘油三脂降低，差異均有統(tǒng)計

8、學意義(p<0.05)。HL+EGb組與HL+RSG組間差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 3、FCM和TUNEL結(jié)果：與NC組相比，HL組大鼠胰島13細胞凋亡率升高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。與HL組相比，HL+EGb組、HL+RSG組大鼠胰島13細胞凋亡率降低，差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，HL+EGb組與HL+RSG組差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 4、bcl-2與bax蛋白表達檢測結(jié)果：與N

9、C組相比，HL組大鼠胰島β細胞bcl-2蛋白表達水平降低，而bax蛋白水平升高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，與HL組相比，HL+EGb組、HL+RSG組大鼠胰島β細胞bcl-2蛋白表達水平升高和bax蛋白水平降低，其差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。HL+EGb組與HL+RSG組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 5、相關(guān)分析結(jié)果：TUNEL指數(shù)與空腹血糖、血清胰島素、血清總膽固醇、血清甘油三酯、游離脂肪酸、bax蛋白表

10、達陽性率呈明顯正相關(guān)(r值分別為0.3467、0.6655、0.3286、0.3474、0.6745、0.8069，P均<0.05)，與bcl-2蛋白表達陽性率呈明顯負相關(guān)(r值為-0.7111，P<0.05)；FCM凋亡翠與空腹血糖、血清胰島素、血清總膽固醇、血清甘油三酯、游離脂肪酸、bax蛋白表達陽性率呈明顯正相關(guān)(r值分別為0.4076、0.4302、0.4056、0.4869、0.4302、0.4880，p均<0.05)，與bc

11、l-2表達陽性率呈明顯負相關(guān)(r值為-0.4561，P<0.05)。 結(jié)論： 1、本實驗應(yīng)用高脂飲食喂養(yǎng)Wistar大鼠4周后出現(xiàn)空腹血糖、空腹胰島素及胰島抵抗指數(shù)升高，伴胰島素敏感性指數(shù)降低，成功制備了胰島素抵抗大鼠模型。 2、銀杏葉提取物能夠降低血清總膽固醇、血清甘油三酯、游離脂肪酸、空腹血糖、空腹胰島素及胰島抵抗指數(shù)，胰島素敏感性指數(shù)增加，改善胰島素抵抗，與羅格列酮的作用相似。 3、銀杏葉提取物可