NF-κB信號(hào)通路參與GDNF對(duì)多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)作用的機(jī)制研究.pdf

1、膠質(zhì)細(xì)胞系源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glia cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)是迄今所知對(duì)中腦黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta，SNc)多巴胺(dopamin，DA)能神經(jīng)細(xì)胞起特異性保護(hù)和促存活作用最強(qiáng)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。為了探索GDNF保護(hù)DA能神經(jīng)細(xì)胞的分子機(jī)制，本研究采用了免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、組織免疫熒光雙標(biāo)染色法、western blot技術(shù)及免疫

2、共沉淀技術(shù)等方法。免疫細(xì)胞化學(xué)和組織免疫熒光雙標(biāo)染色的結(jié)果顯示，絕大部分MN9D細(xì)胞(一種由胚胎小鼠中腦頂蓋DA能神經(jīng)細(xì)胞和N18TG2神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞融合而成的細(xì)胞系，表現(xiàn)出中腦DA能神經(jīng)細(xì)胞的明顯特征)和SNc DA能神經(jīng)細(xì)胞都能表達(dá)NF-kB誘導(dǎo)激酶(NF-kB inducing kinase，NIK)，但這兩種細(xì)胞都很少表達(dá)IkB。此外，western blot的結(jié)果表明，在GDNF的作用下，MN9D細(xì)胞和SNc DA能神經(jīng)細(xì)胞

3、胞漿中磷酸化的IkB激酶α(IkB kinease α，IKKα)和p100的表達(dá)及胞核中p52的表達(dá)有時(shí)間依賴性和濃度依賴性的增加，而這三個(gè)指標(biāo)都是非經(jīng)典NF-kB信號(hào)通路的關(guān)鍵組分；同時(shí)，通過免疫共沉淀觀察到，GDNF促進(jìn)p52與其他的NF-kB家族蛋白，尤其是與p65結(jié)合形成二聚體轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核內(nèi)。因此，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：GDNF能激活DA能神經(jīng)細(xì)胞中的非經(jīng)典NF-kB信號(hào)通路，這條通路在GDNF保護(hù)DA能神經(jīng)細(xì)胞的過程中起到重要作