GDNF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體在行為差異的老年大鼠中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)細胞中的表達.pdf

1、目的:帕金森病(Parkinson's disease,PD)是以中腦黑質(zhì)致密部(substantia nigrapars compacta,SNc)的多巴胺(dopamin,DA)能神經(jīng)細胞進行性退變?yōu)橹饕±硖卣鞯纳窠?jīng)系統(tǒng)疾病。已知膠質(zhì)細胞系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(glial cell line-derivedneurotrohic factor,GDNF)能有效地保護中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)細胞。GDNF發(fā)揮生物學(xué)作用要經(jīng)膜受體介導(dǎo),已知的G

2、DNF受體有配體結(jié)合受體GDNF家族受體α1(ODNF family receptorα1,GFRα1)和跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體RET以及屬于細胞粘附分子家族的可能受體NCAM-140,integrinβ1和N-cadherin。本研究旨在探討在老年大鼠黑質(zhì)部(SN)DA能神經(jīng)細胞中上述受體的表達變化,探討其發(fā)生機制。
　　 方法:1.老年大鼠的篩選及分組將78只老年SD大鼠進行行為學(xué)篩選,首先進行衣架試驗,按評分高低進行排序(評分相

3、同的按照潛伏期長短排序),挑選出前30只和后30只;然后進行水迷宮試驗,按照其找到圓臺的時間長短排序,從評分較高的前30只中挑選所用時間短的前12只作為行為學(xué)表現(xiàn)好的老年大鼠組(老年優(yōu)組),從后30只中挑選出所用時間長的前12只作為行為學(xué)表現(xiàn)差的老年大鼠組(老年差組);再取12只健康成年SD大鼠作為對照(成年組);每組6只用于免疫組化染色,6只用于免疫印跡及高效液相色譜-質(zhì)譜檢測;2.檢測取經(jīng)行為學(xué)篩選出的表現(xiàn)好的和表現(xiàn)差的健康雄性SD

4、老年大鼠(≥18月齡)和正常成年大鼠(4～5月齡)免疫印跡檢測蛋白表達,免疫組織化學(xué)染色,灰度分析電泳條帶,分別對黑質(zhì)部DA神經(jīng)元TH、NCAM-140、RET、integrinβ1及N-cadherin進行分析,并行三組大鼠各指標間的兩兩比較。
　　 結(jié)果:(1)行為學(xué)篩選結(jié)果顯示衣架試驗:評分結(jié)果老年優(yōu)組＞老年差組;潛伏期老年優(yōu)組＞老年差組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);水迷宮試驗:老年大鼠找到圓臺的時間老年差組＞老年

5、優(yōu)組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05),所以老年優(yōu)組的行為學(xué)表現(xiàn)優(yōu)于老年差組。(2)免疫組化染色結(jié)果顯示成年組大鼠黑質(zhì)致密部TH+細胞成簇分布,排列密集,胞體大,形狀規(guī)則,胞漿豐富,胞核著色淡,核仁明顯,胞質(zhì)染色深;老年差組大鼠黑質(zhì)致密部TH+細胞散在分布,TH+細胞數(shù)量少,胞體小,胞漿染色較淡,核仁不明顯;老年優(yōu)組大鼠黑質(zhì)致密部TH+細胞形態(tài)介于兩者之間。(3)免疫印跡法結(jié)果顯示:大鼠黑質(zhì)部TH、RET、NCAM-140、integr

6、inβ1和N-cadherin各總蛋白的表達均為:成年組＞老年優(yōu)組＞老年差組,成年組與老年優(yōu)組,老年優(yōu)組與老年差組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞05),成年組與老年差組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);(4)高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定紋狀體DA含量結(jié)果顯示:成年組＞老年優(yōu)組＞老年差組。老年優(yōu)組高于老年差組,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05);成年組高于老年優(yōu)組,二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:在中腦黑質(zhì)