NF-κB信號(hào)通路介導(dǎo)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖及侵襲、轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)及臨床意義的研究
　　目的：探討NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)及臨床意義。
　　方法：選取青島大學(xué)附屬醫(yī)院石蠟包埋標(biāo)本80例神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織和20例節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤組織病理切片標(biāo)本，免疫組化檢測(cè)神經(jīng)母細(xì)胞瘤標(biāo)本組織和節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤標(biāo)本組織中NF-κB(p65)，COX-2與MMP-9的表達(dá)，并比較年齡、性別、腫瘤大小、

2、腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、有無侵潤(rùn)等與NF-κB，COX-2與MMP-9的表達(dá)的關(guān)系及NF-κB表達(dá)與COX-2與MMP-9的表達(dá)的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果： NF-κB(p65)，COX，MMP-9表達(dá)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織高表達(dá)，在節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤組織病理表達(dá)量較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）。NF-κB(p65),COX-2，MMP-9表達(dá)均與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)

3、移、有無侵潤(rùn)相關(guān)，而與患者年齡、性別、腫瘤大小無關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹤0.01）；NF-κB(p65)表達(dá)與COX-2，MMP-9表達(dá)相關(guān)性分析，我們發(fā)現(xiàn)NF-κB(p65)，COX-2，MMP-9蛋白的表達(dá)呈明顯正相關(guān)(R=0.626,P﹤0.01 AND R=0.612,P﹤0.01)。
　　結(jié)論：1. NF-κB(p65)，COX-2，MMP-9蛋白在神經(jīng)母細(xì)胞瘤均有陽性表達(dá)且高于節(jié)細(xì)胞神經(jīng)瘤組織；2．NF-κB(p65

4、)，COX-2，MMP-9表達(dá)與患者腫瘤INSS分期、Shimada組織分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無侵潤(rùn)相關(guān)；3. NF-κB(p65)蛋白表達(dá)與COX-2，MMP-9蛋白表達(dá)呈明顯的正相關(guān)。
　　第二部分NF-κB信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制探討
　　目的：探討NF-κB信號(hào)通路在神經(jīng)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用及機(jī)制
　　方法：利用transwell檢測(cè)并比較神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞細(xì)胞QDDQ-NM

5、1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的不同侵襲能力，CCK-8檢測(cè)兩株細(xì)胞系增殖能力的不同，Western blort檢測(cè)NF-κB(p65)和p-IκB表達(dá)的差異。用不同濃度(5、10、20、40μmol/L) NF-κB信號(hào)通路抑制劑PDTC預(yù)處理QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系，transwell檢測(cè)觀察兩種細(xì)胞系侵襲能力變化，Real time PCR,Western blort檢測(cè)不同濃度 PDTC預(yù)處理

6、 QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移及QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系NF-κB(p65)，p-IκB，IκB，COX-2，MMP-9表達(dá)的差異。選擇神經(jīng)母細(xì)胞瘤高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系QDDQ-NM1，TNF-α不同時(shí)間和濃度預(yù)處理QDDQ-NM1，促進(jìn)NF-κB信號(hào)通路活化，Real time PCR及Western blort檢測(cè)不同處理下NF-κB(p65)，p-IkBα，IκB，COX-2，MMP-9基因表達(dá)變化，transwell檢測(cè)細(xì)胞系侵襲能力變化

7、。THP-1細(xì)胞系誘導(dǎo)產(chǎn)生巨噬細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞系共培養(yǎng)，模擬體內(nèi)腫瘤微環(huán)境，Real time PCR及Western blort檢測(cè)不同處理下NF-κB(p65)，p-IkBα，COX-2，MMP-9基因表達(dá)變化。
　　結(jié)果：神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞細(xì)胞QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系增殖及侵襲能力高于QDDQ-NM2低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系且QDDQ-NM1中NF-κB(p65)和p-IkBα蛋白表達(dá)高于QDDQ-NM2（P<0.01）。不同

8、濃度NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理QDDQ-NM1高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系，隨濃度增大QDDQ-NM1增殖能力和侵襲能力減弱，p-IκB蛋白表達(dá)逐漸減弱，COX-2，MMP-9蛋白表達(dá)也逐漸減弱（P<0.01）。不同劑量或時(shí)間TNF-α預(yù)處理QDDQ-NM1細(xì)胞系，p-IkBα蛋白,MMP-9,COX-2蛋白表現(xiàn)出劑量和時(shí)間依賴性,不同處理組間細(xì)胞侵襲能力差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。PMA處理THP-1細(xì)胞系和SH-SY5Y細(xì)胞系共培養(yǎng)，共培