免疫負調控分子TIPE2在慢性HBV感染患者中的表達及臨床意義.pdf

1、本文主要從以下幾方面進行了論述：
　　第一部分:免疫負調控分子TIPE2在慢性乙型肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝癌患者中的表達規(guī)律研究
　　研究目的：
　　探討慢性乙型肝炎、肝硬化和肝細胞癌患者外周單個核細胞中TIPE2mRNA的表達規(guī)律，以及其TIPE2 mRNA與臨床指標的相關性。
　　研究方法:
　　本研究采用橫斷面研究設計，采用隨機的方法納入慢性HBV感染患者193例，其中慢性乙型肝炎患者97例，肝硬化患者

2、55例，肝細胞癌患者41例，均為2013年12月至2014年5月間在山東大學齊魯醫(yī)院肝病科住院或門診患者。此外，選擇14例成年健康志愿者作為正常對照。應用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)方法檢測所有患者及健康對照外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs)中TIPE2mRNA表達水平。
　　研究

3、結果:
　　1.慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平明顯高于健康對照組（均P＜0.05）。與肝硬化患者相比，慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平無明顯差異（P＞0.05）。肝細胞癌患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平明顯低于健康對照組（P＜0.01）。
　　2.在慢性乙型肝炎患者，HBVDNA陽性患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平明顯高于H

4、BVDNA陰性患者(P＜0.05)。Spearman秩和相關分析結果表明，慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞中TIPE2 mRNA表達水平與血清ALT水平、血清AST水平和血清PTA水平均呈明顯正相關(r=0.262，P＜0.05; r=0.292，P＜0.05; r=0.207，P＜0.05)，而年齡、白蛋白、膽紅素、凝血酶原時間、乙肝病毒載量與TIPE2 mRNA表達水平無明顯相關（均P＞0.05）。
　　3.在乙肝肝硬化患者，

5、代償期患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平明顯低于失代償期患者(P＜0.05)，腹水陽性患者外周血單個核細胞中TIPE2mRNA表達水平明顯高于腹水陰性患者(P＜0.05)。肝硬化患者外周血單個核細胞中TIPE2 mRNA表達水平與膽紅素和MELD積分呈明顯正相關(r=0.288,P＜0.05;r=0.366,P＜0.01)。
　　4.在肝細胞癌患者，外周血單個核細胞TIPE2 mRNA的表達水平與是否有血管浸潤、腫瘤

6、大小以及TNM分期有顯著相關性，且與AFP呈明顯負相關(r=0.312，P＜0.05)。
　　研究結論:
　　慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平比健康對照組明顯升高，而肝細胞癌患者TIPE2 mRNA表達水平比健康對照組明顯降低。TIPE2 mRNA表達與慢性乙型肝炎患者肝臟損傷、肝硬化病情輕重明顯相關，而與肝細胞癌的腫瘤分期也密切相關。這些結果表明，TIPE2基因參與慢性HBV感染的不

7、同進程，在不同的疾病狀態(tài)可能具有不同的生物學作用。
　　第二部分:免疫負調控分子TIPE2在慢性乙型肝炎臨床免疫分期中的表達研究
　　研究目的:
　　1.探討慢性乙型肝炎不同臨床免疫分期患者外周血單個核細胞內(nèi)TIPE2及其相關炎癥因子包括白介素(Interleukin，IL)-6、IL-10、干擾素（Interferon，IFN）-γ和腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor，TNF)-α基因表達水平的

8、變化規(guī)律。
　　2.探討在慢性乙型肝炎患者肝組織中TIPE2蛋白的表達情況。
　　研究方法:
　　本研究采用回顧性方法共納入205例慢性乙型肝炎患者，包括免疫耐受期患者40例，免疫清除期患者100例，低復制期患者28例和再活動期患者37例，15例健康志愿者作為正常對照。我們采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)方法檢測慢性乙型肝炎患者和健康

9、對照組外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中TIPE2、IL-6、IL-10、IFN-γ和TNF-α基因表達水平。另外，我們還收集了25例行經(jīng)皮肝穿刺活檢的慢性乙型肝炎患者及5例健康肝移植供者的肝組織標本，采用免疫組織化學方法檢測TIPE2在肝組織內(nèi)的表達情況。
　　研究結果:
　　1.慢性乙型肝炎患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平比健康對照組明顯

10、升高（P＜0.05），IL-6、IL-10和TNF-αmRNA表達水平較健康對照者明顯升高，而IFN-γmRNA水平與健康對照組無明顯差異（P＞0.05）。
　　2.免疫清除期患者外周血單個核細胞TIPE2 mRNA表達水平明顯高于再活動期患者(P＜0.05)，低復制期患者TIPE2 mRNA表達水平明顯高于免疫耐受期患者（P＜0.05）。再活動期患者TIPE2 mRNA表達水平與免疫清除期患者相比，無顯著性差異(P＞0.05)，

11、低復制期患者TIPE2 mRNA表達水平和免疫耐受期組相比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.免疫清除期患者外周血單個核細胞IL-10 mRNA表達水平明顯高于低復制期患者（P＜0.05），免疫清除期患者IL-10 mRNA表達水平與免疫耐受期患者相比較明顯升高（P＜0.05）。同時，免疫耐受期患者外周血單個核細胞IL-10mRNA表達水平明顯低于再活動期患者(P＜0.05）。Kruskal-Wallis分析提示外周血單個核細

12、胞IL-6、TNF-α和IFN-γ mRNA表達水平在慢性乙型肝炎不同臨床免疫分期中無明顯差別。
　　研究結論:
　　慢性乙型肝炎免疫清除期和再活動期患者患者外周血單個核細胞TIPE2mRNA水平明顯升高，TIPE2 mRNA表達水平與疾病免疫分期和炎癥程度密切相關。TIPE2蛋白主要在肝細胞細胞質表達，與肝組織炎癥程度和纖維化分期密切相關。綜上所述，TIPE2在慢性乙型肝炎患者的自然病史中發(fā)揮重要作用。
　　第三部分

13、:外周血單個核細胞TIPE2 mRNA作為分子標志物評估慢加急性乙型肝炎肝衰竭預后的診斷價值研究
　　研究目的:
　　1.進一步探討慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者外周血單個核細胞中TIPE2 mRNA的表達規(guī)律，以及TIPE2 mRNA與慢加急性乙型肝炎肝衰竭病情嚴重程度關系;
　　2.評估外周血單個核細胞TIPE2 mRNA作為分子標志物評估慢加急性肝衰竭臨床預后的診斷價值
　　研究方法:
　　本研究采用前瞻

14、性研究方法共納入171例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者，為2009年3月至2014年12月在山東大學齊魯醫(yī)院肝病科住院患者。根據(jù)時間序列不同，將171例慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者分為兩組:2009年3月至2013年5月就診的108例患者作為模型組;2013年6月至2014年12月就診的63例患者作為驗證組。本研究還納入22例健康對照和42例慢性乙型肝炎患者作為臨床對照。我們首先通過密度梯度離心法提取研究對象外周血單個核細胞，Trizol提取

15、總RNA，采用RT-PCR法檢測外周血單個核細胞中TIPE2 mRNA的表達水平。首先采用單因素分析確定臨床指標與肝衰竭預后的相關關系，取單因素分析P值具有統(tǒng)計學意義的臨床指標納入多因素COX比例風險模型，用于鑒定影響慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者臨床預后的獨立危險因素。采用受試者工作特征曲線評估模型組和驗證組外周血單個核細胞TIPE2 mRNA和MELD積分預測慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者預后的診斷價值。
　　研究結果:
　　1

16、.我們對ACHBLF患者進行了6個月的隨訪，由于在隨訪的4個月到6個月期間無患者死亡，因此我們采用3個月生存率評價慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者預后。慢加急性肝衰竭患者3個月死亡率為62％，常見并發(fā)癥肝硬化、肝性腦病、腹水和自發(fā)性腹膜炎各占為59例(54.6％)，39例(36.1％)，50例(46.3％)和40例(37％)。
　　2.模型組慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者TIPE2 mRNA表達水平明顯高于慢性乙型肝炎患者(P＜0.001)

17、和健康對照組(P＜0.001)。在慢加急性乙型肝炎肝衰竭患者中，死亡組外周血單個核細胞TIPE2mRNA表達水平明顯高于存活組患者(P＜0.001)。Spearman秩和相關分析結果表明，TIPE2 mRNA表達水平與MELD積分、HBsAg呈明顯正相關（r=0.544，P＜0.001;r=0.229，P＜0.05）;與PLT呈明顯負相關（r=-0.262，P＜0.05）。
　　研究結論:
　　外周血單個核細胞TIPE2 m