清肝化瘀口服液對介入治療肝癌患者免疫功能及腫瘤轉(zhuǎn)移影響的研究.pdf

1、目的: 原發(fā)性肝細胞癌(HCC)以下簡稱原發(fā)性肝癌，為世界常見難治的惡性腫瘤之一。本研究對經(jīng)導(dǎo)管動脈內(nèi)化療栓塞術(shù)(TACE)術(shù)后患者給予中藥聯(lián)合治療，檢測中藥清肝化瘀口服液對原發(fā)性肝癌患者肝動脈化療栓塞(TACE)術(shù)后血液中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、自然殺傷細胞(NK)及甲胎蛋白(AFP)的變化，測定患者外周血中VEGF及COX-2的含量變化，觀察患者綜合指標(biāo)，探討中藥對TACE術(shù)后機體免疫功能、腫瘤轉(zhuǎn)移潛能及生存質(zhì)量的影

2、響，揭示清肝化瘀口服液對抑制肝癌細胞增殖、降低肝癌細胞COX-2、VEGF表達的作用，從免疫學(xué)和原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移兩方面闡明清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療在原發(fā)性肝癌治療中提高免疫力，減輕毒副作用，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移等方而，進一步探討中藥治療原發(fā)性肝癌的作用以及作用靶點，從而增強病人免疫功能、提高原發(fā)性肝癌患者的生存期，為中藥的臨床研究提供試驗依據(jù)。 方法: 1.病例選擇：隨機選取我院2006年2月至2007年2月間住院原發(fā)性肝癌患者

3、60例，男38例，女22例，年齡48～65歲，平均56.3±7.7歲。所有患者均符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)后組織學(xué)檢查為原發(fā)性肝細胞肝癌；②影像學(xué)檢查有明確實性占位；③甲胎蛋白(AFP)>200μg/L，持續(xù)4周以上。臨床分期按2001年9月中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會制定標(biāo)準(zhǔn)對患者分期，Ⅰ期8例，Ⅱ期42例，Ⅲ期10例。 2.試驗分組：隨機將患者分為試驗組及對照組。 試驗組即TACE+中藥組：原發(fā)性肝癌患者30例，男20例，女10例

4、，平均年齡55.5±8.7歲，其中Ⅰ期5例，Ⅱ期19例，Ⅲ期6例。對照組即單純TACE組：原發(fā)性肝癌患者30例，男18例，女12例，平均年齡56.9±7.9歲，其中Ⅰ期3例，Ⅱ期23例，Ⅲ期4例。 3.標(biāo)本采集：分別于介入術(shù)前1天和介入術(shù)后第28天早晨空腹靜脈采集樣血5ml，分裝不抗凝管與肝素抗凝管，不抗凝管4℃，2500r/min離心10分鐘，分離血清，-30℃保存待測；抗凝管直接送檢。 4 外周血T細胞亞群的檢測：選

5、用三色熒光標(biāo)記的免抗試劑直接熒光染色，采用流式細胞術(shù)進行測定兩組患者治療前后外周血CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細胞活性。 5 血清細胞因子檢測：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測兩組患者治療前后血清中TNF-α和IL-2水平。 6 ELISA法檢測兩組患者治療前后外周血中VEGF蛋白水平表達。 7 RT-PCR法檢測兩組患者治療前后外周血有核細胞中COX-2基因表達。 8 測定T

6、ACE+中藥組及單純TACE組患者治療前后AFP水平 9 檢測兩組患者治療后病灶變化及肝外轉(zhuǎn)移情況：CT和/或彩色多譜勒超聲檢查腫瘤最大直徑乘以其垂直直徑與治療前比較；CT和/或超聲及胸片檢查，隨訪觀察肺、骨、腦及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況。 10 對兩組患者治療后的療效進行判定：按照WHO制定的實體瘤客觀評價標(biāo)準(zhǔn)進行判定及分析。判定標(biāo)準(zhǔn)為：①完全緩解為病灶全部吸收；②部分緩解為病灶部分緩解；③無變化為病灶無變化；④病情進展為病灶

7、進展。 11 對兩組患者治療后生活質(zhì)量進行評價：根據(jù)卡氏功能狀態(tài)(KPS)評分，以治療后較治療前增加>10分為改善，減少>10分為下降，變化≤10分為穩(wěn)定。 12 統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組間比較采用成組設(shè)計的t檢驗；同組治療前后比較采用配對t檢驗；計數(shù)資料比較采用X2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1.TACE+中藥組及

8、單純TACE組兩組患者T細胞亞群和NK細胞比較：兩組患者治療前外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK測定值無顯著性差異，兩組具有可比性；原發(fā)性肝癌介入治療后28日時，檢測患者外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細胞測定值分別為0.23±0.18，0.18±0.04，1.12±0.46及10.68±3.01，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細胞測定值分別為0

9、.55±0.11，0.35±0.09，1.65±0.29及31.07±6.56，結(jié)果顯示經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后外周血中CD3+，CD4+，CD4+/CD8+、NK細胞較單純介入治療組明顯增高(P<0.05)，提示清肝化瘀口服液可有效增強原發(fā)性肝癌介入治療患者的細胞免疫。 2.原發(fā)性肝癌患者介入治療前后血清TNF-α和IL-2水平比較：患者經(jīng)介入治療后TNF-α濃度明顯下降(P<0.05)，IL-2濃度增高。 3.

10、TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血細胞因子TNF-α及IL-2的比較：兩組患者治療前外周血細胞因子TNF-α及IL-2測定值無顯著性差異，兩組具有可比性；TACE+中藥組介入治療后外周血細胞因子TNF-α含量為10.85±1.67，顯著低于單純TACE組的13.56±1.55，說明清肝化瘀口服液可協(xié)助TACE有效降低TNF-α表達量(P<0.05)：TACE+中藥組介入治療后外周血細胞因子IL-2含量為32.83±3.0

11、3，高于單純TACE組的28.05±2.95，說明清肝化瘀口服液可協(xié)助TACE有效增強IL-2的表達(P<0.05)。 4 TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血中VEGF表達的比較：兩組患者治療前，血清VEGF表達量無顯著性差異，兩組具有可比性；原發(fā)性肝癌患者介入治療后28日時，檢測患者外周血中VEGF表達量為456.08±175.49，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血中VEGF表達量為207.49±93.

12、22，結(jié)果顯示清肝化瘀口服液聯(lián)合治療可有效降低介入治療后增高的VEGF(P<0.05)。 5 TACE+中藥組及單純TACE組介入治療前后外周血有核細胞中COX-2表達比較：治療前，兩組患者COX-2陽性表達率及表達量無顯著性差異，兩組具有可比性；介入治療后28日時，檢測TACE+中藥組與單純TACE治療組患者外周血有核細胞中COX-2表達量比較發(fā)現(xiàn)，經(jīng)清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者外周血有核細胞中COX-2表達陽性率為47.

13、77％，明顯低于單純TACE治療組的55.69％(P<0.05)，同時表達量也低于單純TACE治療組。提示清肝化瘀口服液可有效降低原發(fā)性肝癌介入治療患者外周血有核細胞中COX-2的表達。 6 原發(fā)性肝癌患者中藥清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后患者中有6例發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移率為20％，單純TACE組發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移14例，肝外轉(zhuǎn)移率為43.3％，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 7 原發(fā)性肝癌患者TACE+中藥組，部分緩解患

14、者24例，有效率為80％，單純TACE治療組部分緩解者12例，有效率為40％，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 8 原發(fā)性肝癌患者中藥清肝化瘀口服液聯(lián)合介入治療后KPS評分后判定，生活質(zhì)量改善者13例，改善率為43.3％，單純TACE組生活質(zhì)量改善者6例，改善率僅20％，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論: 1.TACE+中藥組NK細胞下降的幅度低于單純TACE治療組，CD3+，CD4+，CD

15、4+/CD8+的值高于單純TACE治療組說明清肝化瘀口服液對化療引起的細胞免疫抑制有一定的保護作用。 2.TACE+中藥組外周血中VEGF及COX-2表達顯著降低，說明TACE聯(lián)合應(yīng)用清肝化瘀口服液在抑制腫瘤內(nèi)血管生成、防止腫瘤轉(zhuǎn)移中具有重要作用。 3.TACE+中藥組在瘤體客觀療效及臨床癥狀的緩解率上均優(yōu)于單純TACE治療組，說明化療介入聯(lián)合應(yīng)用清肝化瘀口服液治療原發(fā)性肝癌在瘤體縮小、緩解臨床癥狀方面優(yōu)于單純西醫(yī)治療。

16、 4 治療后兩組病例生活質(zhì)量的比較，TACE+中藥組優(yōu)于單純TACE治療組，提示中西醫(yī)結(jié)合治療原發(fā)性肝癌可以改善或提高患者的生活質(zhì)量。 5 TACE+中藥組AFP值下降顯著，與單純TACE組有統(tǒng)計學(xué)意義，提示化療介入配合清肝化瘀口服液可以較好地降低血中AFP水平。 6 從化療的不良反應(yīng)如肝功能損害出現(xiàn)的情況看，TACE+中藥組低于單純TACE治療組，說明清肝化瘀口服液輔助西醫(yī)化療介入治療原發(fā)性肝癌在減輕化療毒副作