健脾益肺口服液對慢阻肺“肺脾氣虛證”大鼠免疫功能及氣道炎癥的影響.pdf

1、[目的]：
　　 探明健脾益肺口服液對慢性阻塞性肺疾病穩(wěn)定期大鼠免疫功能、氣道炎癥的影響，求證健脾益肺口服液是否通過NF-κB信號傳導途徑來調(diào)節(jié)慢阻肺大鼠免疫功能及抑制其氣道炎癥，為健脾益肺口服液臨床治療慢阻肺病人提供實驗依據(jù)，從而進一步論證將“健脾益肺法”作為慢阻肺穩(wěn)定期中醫(yī)藥治療手段的可行性和重要性；深入理解“肺脾氣虛”這一慢阻肺穩(wěn)定期中醫(yī)證型和客觀指標“免疫功能低下”及“氣道炎癥指標”等的相關(guān)性，加深對慢阻肺穩(wěn)定期肺脾氣虛

2、證本質(zhì)的認識，促進中醫(yī)證型客觀化，對指導中醫(yī)藥治療慢阻肺穩(wěn)定期的基礎(chǔ)研究具有重要意義。
　　 [方法]：
　　 1．理論探討方面：對慢阻肺中醫(yī)病機進行深入探討；深入分析健脾益肺法治療慢阻肺的依據(jù)；探析健脾益肺口服液的方義，分析其用于調(diào)節(jié)慢阻肺免疫功能、抑制氣道炎癥的可行性。
　　 2．實驗研究方面：將65只SD成年雄性大鼠隨機分為6組，空白對照組10只、其余各組每組11只，分別為模型組、健脾益肺口服液高、中、低劑

3、量組及地塞米松陽性藥對照組；用香煙煙熏加脂多糖復合因素復制慢阻肺“肺氣虛證”動物模型，然后用大黃煎液灌胃復制“脾氣虛證”模型：造模28天結(jié)束，在14天開始按照實驗設(shè)計給藥，28天后測定指標；觀察各組大鼠整體情況、HE染色后觀察各組基本病理變化：MASSON染色后觀察各組膠原含量、平滑肌厚度等；應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)測定支氣管平滑肌厚度、氣管內(nèi)徑等，計算支氣管平滑肌指數(shù)、膠原纖維面積；取動脈血，抗凝后用動脈血氣分析儀測定大鼠PaCO2、PaO2

4、、PH及SaO2等動脈血氣指標；取血后剝離大鼠胸腺、脾臟，根據(jù)體質(zhì)量計算大鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)；麻醉后取血，抗凝后用流式細胞儀測定血液中CD3+、CD4+、CD8+的表達率，并計算CD4+/CD8+比值；部分血液離心后取血清，用ELISA試劑盒測定IgG、IgA、IgM水平及IL-8、TNF-α活性；取大鼠肺部組織，液氮速凍研磨用trizol提取組織mRNA，逆轉(zhuǎn)錄后，設(shè)計引物進行real-timePCR擴增，以內(nèi)參為對照，觀察各組肺組

5、織IL-8、TNF-αmRNA的基因表達；肺部組織用試劑盒提取組織蛋白質(zhì)，利用蛋白印跡(WB，Westernblotting)方法，測定各組肺組織NF-κB和I-κB的表達。
　　 [結(jié)果]：
　　 1．通過對動物模型的整體觀察及肺組織病理學結(jié)果，證實了慢阻肺“肺脾氣虛證”動物模型的復制是成功的，從而為實驗的順利進行提供了依據(jù)；
　　 2．健脾益肺口服液能顯著改善慢阻肺實驗大鼠的整體情況，如咳嗽、體重、精神狀態(tài)等

6、；
　　 3．健脾益肺口服液能顯著抑制大鼠氣道炎癥，降低膠原含量、膠原纖維面積、支氣管平滑肌指數(shù)，改善氣道重塑，作用類似于或優(yōu)于地塞米松，以高、中劑量組為佳；
　　 4．健脾益肺口服液能改善大鼠缺氧狀態(tài)，由此提高大鼠的存活率，改善生存質(zhì)量，但對PCO2、PH無明顯改善作用；
　　 5．健脾益肺口服液能顯著提高慢阻肺大鼠細胞及體液免疫功能，降低其急性發(fā)作次數(shù)；
　　 6．健脾益肺口服液能抑制IL-8、TNF

7、-α炎性標志物的濃度及IL-8、TNF-αmRNA在肺組織的表達，療效以高、中劑量組為佳；
　　 7．健脾益肺口服可增加慢阻肺大鼠體質(zhì)量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，提高機體免疫力，增強防病抗病能力；
　　 8．健脾益肺口服液可降低NF-κB在肺組織的表達，提高了I-κB的表達。而NF-κB信號傳導途徑在慢阻肺氣道炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)中起著重要作用，本實驗健脾益肺口服液提高了免疫功能、抑制了氣道炎癥，同時下調(diào)NF-KB在肺組織的表

8、達，上調(diào)I-κB的表達，故推測健脾益肺口服液可能通過NF-κB信號傳導途徑調(diào)節(jié)COPD免疫功能、抑制氣道炎癥。
　　 [結(jié)論]：
　　 1．肺脾氣虛直接關(guān)系到慢阻肺的發(fā)生、發(fā)展，為慢阻肺穩(wěn)定期的病機關(guān)鍵。從“肺脾氣虛證”的病機出發(fā)，立法健脾益肺，通過健脾而達到補益肺氣的目的。
　　 2．健脾益肺口服液能增強慢阻肺實驗大鼠免疫功能、抑制其氣道炎癥，改善氣道重塑，且一般以高、中劑量組為佳，對部分指標的療效呈劑量依賴性

9、；其機制可能為通過NF-κB信號傳導途徑抑制慢阻肺大鼠氣道炎癥、調(diào)控其免疫功能；并有可能通過下調(diào)炎癥因子調(diào)節(jié)慢阻肺免疫功能。
　　 3．慢阻肺“肺脾氣虛證”病證結(jié)合動物模型的成功復制使研究更有針對性，在中醫(yī)基礎(chǔ)研究與臨床研究之間架起了橋梁，有助于中醫(yī)藥作用機制的研究，且對于深層次探討中西醫(yī)理論的內(nèi)在聯(lián)系有重要意義。
　　 4．本研究加深了對慢阻肺穩(wěn)定期“肺脾氣虛證”本質(zhì)的認識，在促進中醫(yī)藥療效機制的闡明及中藥新藥的研發(fā)中