清肝化瘀方藥對(duì)原發(fā)性肝癌患者的療效及肝癌患者含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用.pdf

1、目的：原發(fā)性肝癌是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，死亡率占第二位。由于肝癌起病隱匿，早期常無明顯癥狀，一旦發(fā)現(xiàn)多為中晚期，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。目前多采用肝動(dòng)脈插管化療栓塞（TACE）、超聲引導(dǎo)無水乙醇瘤內(nèi)注射（PEI）、多電極射頻、超聲聚焦刀等局部治療，以及中醫(yī)治療。姚樹坤教授根據(jù)中醫(yī)傳統(tǒng)理論和近十年的臨床研究，以清熱解毒、破瘀散結(jié)、健脾益氣為治法，針對(duì)大多數(shù)患者的中醫(yī)證型，研制成清肝化瘀方藥，從臨床和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)對(duì)肝癌前病變及癌變有明顯的阻斷作用

2、。從癌基因、抑癌基因、抑制血管形成、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期和免疫機(jī)制等多角度綜合研究清肝化瘀方藥的作用機(jī)理，表明清肝化瘀方藥多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)分子網(wǎng)絡(luò)的作用機(jī)理，豐富與完善了中藥抗癌研究的理論體系。本實(shí)驗(yàn)觀察清肝化瘀方藥對(duì)原發(fā)性肝癌患者的療效及肝癌患者含藥血清經(jīng)丙酮或乙醇處理后對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　 方法：參照2001年全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的原發(fā)性肝癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)和臨床分期標(biāo)準(zhǔn)，選擇Ⅱb期或雖為Ⅲ期（沒有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、肝功能Chil

3、d-Pugh B級(jí)），不能手術(shù)及肝動(dòng)脈插管化療栓塞的，肝膽濕熱伴有血瘀證原發(fā)性肝癌患者20名，所有病例不同程度地伴有腹痛、納差、黃疸、消瘦、乏力等。其中男性13例，女性7例，年齡在46-75歲之間，平均年齡（53.2±5.5）歲。Ⅱb期患者9例，Ⅲa期11例。
　　 1、患者給予清肝化瘀方藥20ml，每日2次，飯后服用，42天為一療程。服藥期間忌食生冷、油膩、辛辣食品。每周觀察并記錄患者的臨床表現(xiàn)，每?jī)芍軝z查肝功能及甲胎蛋白，于

4、用藥結(jié)束后復(fù)查CT，觀察腫瘤緩解情況。
　　 2、患者分別于服藥前、服藥2周、4周、6周服藥后2小時(shí)靜脈采血10ml，分離血清。預(yù)處理（向血清內(nèi)加入4倍量的丙酮混均，3000r/min離心，取上清溫水浴蒸發(fā)，除去丙酮）。采用四唑鹽比色法（簡(jiǎn)稱MTT）比較經(jīng)丙酮處理后含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖的抑制作用。
　　 3、患者分別于服藥前、服藥2周、4周、6周服藥后2小時(shí)靜脈采血10ml，分離血清。預(yù)處理（向血清內(nèi)

5、加入4倍量的乙醇混均，3000r/min離心，取上清溫水浴蒸發(fā)，除去乙醇）。采用MTT法比較經(jīng)乙醇處理后含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制作用。
　　 結(jié)果：1、患者于用藥后腹脹、肝區(qū)疼痛、納差、食欲不振各單項(xiàng)積分較用藥前明顯減少，且都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有效率分別為：70.59％；76.92％；84.62％；83.33％。各癥狀平均消失時(shí)間為分別為17.4、19.5、14.8、15.2天，且緩解后未再次出現(xiàn)。各項(xiàng)生化指標(biāo)及 AF

6、P較用藥前均有明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各指標(biāo)與用藥前相比有明顯差異（P<0.05）?；颊叻们甯位龇剿幒笸耆徑?例，部分緩解0例，穩(wěn)定12例，穩(wěn)定率為60％。KPS評(píng)分改善者15例，占75％，穩(wěn)定3例，降低2例。
　　 2、未經(jīng)丙酮處理的用藥6周后肝癌患者清肝化瘀方藥含藥血清作用24小時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖即體現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，抑制率可達(dá)28.6％，P=0.032，作用48小時(shí)，抑制作用更加明顯，抑制率可達(dá)34.5％，P=0.03

7、5。經(jīng)過丙酮處理的肝癌患者清肝化瘀方藥含藥血清作用24小時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的抑制作用較未經(jīng)丙酮處理含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721抑制作用稍弱，用藥6周患者含藥血清培養(yǎng)24小時(shí)抑制率可達(dá)26.8％，P=0.029。作用48小時(shí)后抑制率增強(qiáng)，抑制率可達(dá)33.1％，P=0.024，抑制效應(yīng)呈時(shí)間依賴性，隨著肝癌患者用藥時(shí)間延長(zhǎng)和對(duì)肝癌細(xì)胞作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率增強(qiáng)。
　　 3、未經(jīng)乙醇處理的用藥6周后肝癌患者清肝化瘀

8、方藥含藥血清作用24小時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞增殖即體現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，抑制率可達(dá)29.2％，P=0.043，作用48小時(shí)，抑制作用更加明顯，抑制率可達(dá)36.2％，P=0.029，并且對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制率隨患者用藥時(shí)間延長(zhǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)而增加。經(jīng)過乙醇處理的肝癌患者清肝化瘀方藥含藥血清作用24小時(shí)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的抑制作用較未經(jīng)乙醇處理含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2抑制作用稍弱，用藥6周患者含藥血清抑制率可達(dá)24.9％，P=0.022。作用4

9、8小時(shí)后抑制率增強(qiáng)，用藥6周患者含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的抑制率最高可達(dá)33.2％，P=0.028。抑制效應(yīng)同樣呈時(shí)間依賴性，隨著肝癌患者用藥時(shí)間延長(zhǎng)和對(duì)肝癌細(xì)胞作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率增強(qiáng)。
　　 結(jié)論：1、清肝化瘀方藥能明顯緩解原發(fā)性肝癌患者的臨床癥狀，降低各項(xiàng)生化指標(biāo)及AFP值，改善肝功能分級(jí)，腫瘤穩(wěn)定率為60％。
　　 2、經(jīng)丙酮處理后肝癌患者含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721抑制作用較未處理含藥血清弱。說明