592nm和630nm低強(qiáng)度激光對人皮膚成纖維細(xì)胞的刺激效應(yīng).pdf

1、目的:利用激光的生物刺激效應(yīng)研究低強(qiáng)度592nm和630nm激光對成年人及老年人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活性的作用,以及對前膠原基因和細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD基因表達(dá)的影響,為低強(qiáng)度592nm和630nm激光用于改善皮膚老化提供細(xì)胞學(xué)依據(jù)和可供參考的治療參數(shù)。
　　 方法:1.用體外培養(yǎng)的成年人和老年人真皮成纖維細(xì)胞作為細(xì)胞模型,分別以波長592nm和630nm的連續(xù)激光對細(xì)胞進(jìn)行照射,照射功率為10mw和30mw,功率密度為3.

2、5mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射2min、5min和10min,連續(xù)照射3d,用于檢測細(xì)胞增殖活性；功率密度為3.5mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射5min和10min,連續(xù)照射3d,用于檢測前膠原基因和SMADsmRNA表達(dá)。2.激光照射前以及每次照射后24h,用相差顯微鏡對細(xì)胞照相,比較細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量的變化。3.用MTT比色法檢測細(xì)胞增殖活性。4.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞前膠原Ⅰ型α1、Ⅰ型

3、α2、Ⅲα1以及SMADsmRNA的表達(dá),用Bandscan5.0凝膠成像系統(tǒng)分析軟件測定PCR產(chǎn)物電泳條帶的光密度值。5.應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:1.592nm和630nm激光照射細(xì)胞后,增殖活性增強(qiáng),在不同功率密度之間差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),細(xì)胞增殖活性由高到低依次為3.5mw/cm2水平、10.6mw/cm2水平和未照射水平即對照組。2.細(xì)胞增殖活性在不同的照射時(shí)間之間差異具有

4、顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),細(xì)胞增殖活性由高到低依次為照射5min水平、照射2min水平、照射10min水平和未照射水平即對照組。3.592nm和630nm激光照射后,功率密度為3.5mw/cm2、分別照射5min和10min時(shí),與對照組相比,Ⅰ、Ⅲ型前膠原和SMAD2、3的mRNA表達(dá)增強(qiáng),差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),基因表達(dá)依次為照射5min水平、10min水平和未照射水平即對照組。4.592nm和630nm激光

5、照射后,功率密度為10.6mw/cm2、照射5min時(shí),與對照組相比,Ⅰ、Ⅲ型前膠原和SMAD2、3的mRNA表達(dá)增強(qiáng),差異具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；在照射10min時(shí)與對照組相比,Ⅰ、Ⅲ型前膠原和SMAD2、3的mRNA表達(dá)增強(qiáng)不具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.低強(qiáng)度592nm和630nm激光照射成人和老年人真皮成纖維細(xì)胞,能夠刺激細(xì)胞增殖和前膠原基因的表達(dá),并且隨照射功率密

6、度和時(shí)間而改變,較低的功率密度(3.5mw/cm2)對細(xì)胞的刺激作用比較高的功率密度(10.6mw/cm2)強(qiáng),較短的照射時(shí)間(5min)對細(xì)胞的刺激作用比較長照射的時(shí)間(10min)強(qiáng)。
　　 2.照射后細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMADs的mRNA表達(dá)增強(qiáng),提示通過SMAD轉(zhuǎn)導(dǎo)信號的細(xì)胞因子TGF-β升高,低強(qiáng)度激光促進(jìn)成纖維細(xì)胞自分泌TGF-β。
　　 3.由于592nm和630nm的激光能夠穿透表皮到達(dá)真皮,低強(qiáng)度592