供者特異性輸注聯(lián)合地塞米松延長(zhǎng)小鼠皮膚移植物存活的研究.pdf

1、目的：探討供者脾細(xì)胞特異性輸注聯(lián)合地塞米松誘導(dǎo)移植物長(zhǎng)期存活的機(jī)理。 方法：1.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：建立Balb/c小鼠到C57BL/6小鼠皮膚移植模型。實(shí)驗(yàn)組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細(xì)胞尾靜脈輸注并于次日開(kāi)始給予地塞米松Dex腹腔注射(10mg/kg/day)，共7天，給藥結(jié)束后行皮膚移植；對(duì)照組：受者移植前8天給予Balb/c裸鼠脾細(xì)胞尾靜脈輸注后，未進(jìn)行任何處理即行皮膚移植。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分別檢測(cè)地塞米松處理7

2、天后以及移植后7天受者脾淋巴細(xì)胞CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例和凋亡細(xì)胞比例的改變，并采用HE染色組織病理學(xué)觀(guān)察術(shù)后7天移植皮片的病理表現(xiàn)，以及觀(guān)測(cè)移植皮片存活時(shí)間。2.體外實(shí)驗(yàn)：?jiǎn)蜗蚧旌狭馨图?xì)胞培養(yǎng)(MLC)。實(shí)驗(yàn)組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小鼠脾細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中的實(shí)驗(yàn)組Dex處理7天和皮膚移植后7天的脾細(xì)胞分別作為反應(yīng)細(xì)胞；對(duì)照組：絲裂霉素C處理后失去增殖活性的Balb/c(H-2d)小

3、鼠脾細(xì)胞作為刺激細(xì)胞，正常C57BL/6小鼠(H-2b)的脾細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞，體外混合培養(yǎng)48小時(shí)后，采用AlamarBlue染色法檢測(cè)同種抗原刺激后脾細(xì)胞增殖活性變化。 結(jié)果：預(yù)致敏并給予7天地塞米松后，經(jīng)過(guò)48h單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)細(xì)胞對(duì)Balb/c同種抗原的增殖率為18.52±2.81％，顯著低于對(duì)照組的29.18+5.53％(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組反應(yīng)細(xì)胞中CD4+CD25+Treg比例為3.62±0.66％

4、，顯著高于對(duì)照組的2.22±0.29％(P＜0.05)；凋亡細(xì)胞比例為38.29±1.73％，顯著高于對(duì)照組的23.18±1.32％(P＜0.05)。移植后7天體外混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)后實(shí)驗(yàn)組受鼠脾細(xì)胞對(duì)Balb/c同種抗原的增殖率為25.07±0.62％，顯著低于對(duì)照組的34.29±0.94％(P＜0.05)。移植皮膚發(fā)生排斥反應(yīng)后，實(shí)驗(yàn)組受鼠脾淋巴細(xì)胞中CD4+CD25+Treg的比例為3.39±0.21％，高于對(duì)照組的1.57±0.3

5、％(P＜0.05)；凋亡細(xì)胞的比例為17.43±2.26％，高于對(duì)照組的13.11±2.09％(P＜0.05)。取移植皮片組織病理學(xué)檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組移植皮片淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度明顯輕于對(duì)照組，組織結(jié)構(gòu)基本完整。本方案處理后移植皮片平均存活時(shí)間(MST)為19.27±1.68天，顯著長(zhǎng)于對(duì)照組的11.56±1.19天(n=6)，(P＜0.05)。 結(jié)論：供者脾細(xì)胞特異性輸注聯(lián)合地塞米松通過(guò)清除同種反應(yīng)性T細(xì)胞克隆，誘導(dǎo)受者脾淋巴細(xì)胞中