抗白血病轉(zhuǎn)移藥物篩選模型的建立.pdf

1、目的：建立人白血病雞胚轉(zhuǎn)移模型，為研究白血病發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制，體外篩選抗白血病藥物奠定基礎(chǔ)。 方法：體外培養(yǎng)K562細(xì)胞，電穿孔轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白表達(dá)質(zhì)粒后，經(jīng)藥物篩選和單克隆化，獲得穩(wěn)定高表達(dá)綠色熒光蛋白的K562細(xì)胞，將表達(dá)GFP的白血病細(xì)胞經(jīng)絨毛尿囊膜血管種植到12天齡的雞胚里，孵育5～7天后觀察K562細(xì)胞在雞胚中的轉(zhuǎn)移情況。用同樣的方法，將雞胚隨機(jī)分為空白對照組、鏈激酶(SK)組、虎眼萬年青皂甙(OSW-1)組、虎眼萬年青

2、皂甙和鏈激酶聯(lián)合用藥組，經(jīng)絨毛尿囊膜血管向12天齡的雞胚分別注射鏈激酶(2000U/雞胚)+GFP+K562、虎眼萬年青皂甙(10mg/kg)+GFP+K562、OSW-1+SK+GFP+K562后，繼續(xù)孵育5～7天后，收集組織在熒光顯微鏡下觀察藥物抑制轉(zhuǎn)移情況。 結(jié)果：電穿孔轉(zhuǎn)染GFP表達(dá)質(zhì)粒的K562細(xì)胞，經(jīng)篩選，獲得穩(wěn)定高表達(dá)GFP的K562細(xì)胞。種植到雞胚后，在其腦部、胸骨及心臟等部位可觀察到綠色熒光，加用藥物后收集組織

3、在熒光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)SK和OSW-1均有抑制轉(zhuǎn)移作用，聯(lián)合用藥的抗轉(zhuǎn)移效果更好，其中SK最適用量為2000U/雞胚，OSW-1最適用量為10mg/kg，提示抗白血病轉(zhuǎn)移藥物篩選模型建立成功。 結(jié)論：成功構(gòu)建了表達(dá)綠色熒光蛋白的白血病雞胚轉(zhuǎn)移模型，發(fā)現(xiàn)雞胚的腦部、胸骨、心臟等部位均可以發(fā)生白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤，證實(shí)了白血病轉(zhuǎn)移最頻繁的部位是腦部，可發(fā)生心臟浸潤。并驗(yàn)證了SK和OSW-1均有抑制白血病細(xì)胞轉(zhuǎn)移作用，而SK和OSW